人肺表面活性物质相关蛋白a的提纯与生物活性分析

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1、人肺表面活性物质相关蛋白A的提纯与生物活性分析作者：薛立军，陈志远，封志纯，张志浩，杜江，陈刚，袁扬，黄京慧，马国宣，车审言【摘要】　　目的：提取煤工尘肺患者双肺大容量灌洗回收液中肺表面活性物质相关蛋白A（SPA）。方法：利用离心、透析，制备亲和层析柱提纯SPA，利用ELISA法鉴定，高效液相色谱法测定含量和纯度，膜天平测定活性。结果：所提纯SPA含量平均为每人次（1.3692±0.3885）g，纯度（92.20±7.00）%。加入PS+SPA较单纯加入PS显著改变了膜表面张力，方差分析显示P<0.05，差异有统计学意义。结论：本试验较好

2、地提纯SPA并保持活性，方法可行。【关键词】肺表面活性物质相关蛋自A人提纯分析　　［Abstract］Objective:ToextractpulmonarysurfactantassociatedprotEinA(SPA)fromderelictoconiosis.Methods:SPAtheprimaryproduction,inedatogram,andidentifiedictensionrecorder.Results:TheaveragecontentofSPAeachpatient,and(92.20±7.00)%inextra

3、ctedsamples.Theaveragesurfacetensionongthreegroups.Conclusions:ItisfeasibletoextractSPAonarySurfactantassociatedProtEInA;Human;Extraction;Analysis　　肺表面活性物质相关蛋白A（PulmonarySurfactantassociatedProteinA，SPA）是肺表面活性物质（PulmonarySurfactant，PS）的主要蛋白成分，制备人SPA对PS基础研究和临床应用具有重要意义［14］。2

4、006年10月我们以抗人SPA单克隆抗体制作亲合层析柱达到了提纯人源性SPA的目的，报道如下。　　1材料、试剂和仪器　　1.1材料和试剂　　2006年10月随机收集8例煤工尘肺（CoalTP1型膜天平测定液体表面张力，比较产品SPA生物活性。选择8例CWP患者WLL液所提纯的SPA产品，先后在蒸馏水中加入PS（Exsurf，DPPC）50μL，8例产品SPA50μL，形成自身对照的3组液体表面张力数据：A组8例蒸馏水、B组8例蒸馏水+PS50μL、C组8例蒸馏水+PS50μL+8例产品SPA50μL。　　2.4统计学分析实验数据以均数±标

5、准差表示，采用SPSS13.0统计软件处理，三组间均数比较采用单向方差分析（ONEWAYANOVA，LSD法），取α=0.05。　　3结果　　3.1ELISA鉴定　　结果见表1。　　表1ELISA定性鉴定SPA（略）　　注：1～8为8例SPA产品，9为SPA标准品，10为空白对照　　3.2SPA含量　　根据色谱峰面积计算。SPA标准品、样品1的色谱图分别见图1和图2。　　峰面积：155182，含量：0.50g　　图１SPA标准品色谱图（略）　　峰面积：531705，含量：1.7131g　　图２样品1SPA色谱图（略）　　3.3样品纯度　

6、　8例产品SPA含量、纯度见表2。　　表2样品蛋白总量和SPA含量表（略）　　3.4体外活性测定　　3.4.1表面活性比较结果见表3。　　表3A、Ｂ、Ｃ组的表面活性比较（略）　　注：和A组比较，*P<0.05，**P<0.01；Ｃ组和B组比较，#P<0.05，##P<0.01。　　3.4.2体外活性测定曲线3组表面张力曲线变化见图3、图4和图5。　　图3Ａ组表面活性曲线（略）　　图4Ｂ组表面活性曲线（略）　　图5Ｃ组表面活性曲线（略）　　4讨论　　SPA是PS的主要蛋白成分，制备人SPA对基础研究和临床应用具有重要意义［

7、14］。天然PS存在于肺泡和终末呼吸道表面，由Ⅱ型细胞分泌，随呼吸时肺泡表面积变化来改变气液界面的张力，使肺泡在呼气时不致萎陷。人工合成磷脂配方（DPPC∶PG）缺乏肺表面活性物质蛋白，疗效远没有天然PS好。天然的人PS从羊水中得来，获取困难［310］。本试验试图变废为宝，从人肺灌洗液得到人SPA。　　本试验利用抗人SPAmAbs制备亲和层析柱，通过抗原抗体特异性结合，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到纯化SPA的目的。根据ELISA方法鉴定SPA，其显色甚至优于标准品，说明产品的抗原性经过提取工艺没有显著破坏。产品每人次灌洗回收液240

8、00mL可以回收SPA（1.3692±0.3885）g，纯度达到92.20%±7.00%，优