甘草次酸脂质体的包封率测定和体外释放度考察

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1、甘草次酸脂质体的包封率测定和体外释放度考察【摘要】【目的】测定甘草次酸(GA)脂质体的包封率，并考察其体外释放规律。【方法】采用注入法制备甘草次酸脂质体，用葡聚糖凝胶G50柱分离GA脂质体和游离GA，高效液相色谱(HPLC)法测定包封率。按照中国药典(2005年版)溶出度第3法考察甘草次酸脂质体体外释放规律。【结果】测得甘草次酸脂质体平均包封率为9161%，甘草次酸脂质体的体外释放曲线符合Higuchi方程。【结论】甘草次酸脂质体具有较高的包封率，在体外具有良好的缓释作用。【关键词】甘草次酸/生产和制备;脂质体;体

2、外释放;包封率;色谱法，高压液相　　甘草次酸(glycyrrhetinicacid，GA)为中药甘草的主要有效成分，主要从甘草的根部或根茎提取而得，属五环三萜皂苷类化合物。已知甘草次酸具有明显的抗炎、抗病毒、抗肿瘤和防癌作用[1-2]，临床上常用来治疗慢性肝炎及肝癌。由于GA难溶于水，口服几乎不吸收，普通注射剂的生物利用度低，通过脂质体制备技术将GA包裹于磷脂双分子层中，可以增加难溶性药物的水溶性，改变被包封药物的体内分布使其具有一定的靶向性[3]，提高药物与肿瘤细胞的亲和性。本研究制备了GA脂质体，并对其包封率和体外

3、释放度进行了考察，现报道如下。　　1主要仪器与试剂　　主要仪器如下：JEM1400高衬度透射电子显微镜(日本电子公司)，Zetasizer1000HA粒度仪(英国Malvern公司)，Zetasizer激光粒度测定仪(英国Malvern公司)，901型恒温磁力搅拌器(上海沪西分析仪器厂)，Dionex高效液相色谱仪(HPLC，P680型泵，PDA100型检测器，ASI100自动进样器，美国戴安公司)，Spectrum透析袋(Ma公司)，SephadexG50(瑞典Pharmacia公司)，甲醇为色谱纯，其他药

4、品、试剂均为国产分析纯。　　2方法与结果　　21GA脂质体的制备　　采用注入法[4]制备GA脂质体。定量称取磷脂、胆固醇、GA及十八胺溶于适量的无水乙醇中，将所得类脂溶液缓慢匀速地注入到恒温55℃的磷酸盐缓冲液(PBS，pH74)中，注入过程中通入N2以除去乙醇。注入完毕后，45℃孵育20min后，依次经08、045、02μm的微孔滤膜即得GA脂质体。　　22脂质体的形态、粒径和Zeta电位测定　　GA脂质体供试品适当稀释后，用质量分数1%的磷钨酸负染，于透射电镜下观察其形态并照相。另取GA脂质体供试品经适

5、当稀释，用激光粒径分析仪分别测定脂质体的平均粒径和Zeta电位，结果见图1～图3。测得3批供试品的平均粒径为(141±10)nm(N=3)，平均Zeta电位为(359±5)mV(N=3)。　　23包封率和体外释放测定方法[5]　　231色谱条件固定相LunaC18色谱柱(250mm×46mm，5μm，Phenomenex)，流动相为甲醇—水—冰醋酸(体积比89∶10∶1)[6]，流速为10mL/min，检测波长为250nm，柱温为30℃，进样量为20μL。　　232色谱图的制备分别取处方量配比的空白脂质

6、体，GA对照品和GA脂质体用适量甲醇溶解后按上述色谱条件进样测定，并记录色谱图，结果见图4。由结果可见，脂质体辅料对GA含量测定无干扰。　　t/mint/mint/min　　a.GA对照品b.GA脂质体c.空白脂质体　　图4高效液相色谱图　　Figure4HPLCchromatogramsofGAliposomes　　233方法学考察精密称定GA对照品101mg于100mL量瓶中。甲醇溶解定容至刻度得GA储备液。精密吸取上述储备液05、10、50、100、200、400mL分别于50mL量瓶中，甲醇定

7、容，得101、202、1010、2020、4040、8080mg/L的溶液。按231项下色谱条件，取不同浓度溶液分别进样，记录峰面积。以峰面积(A)对对照品浓度(C)回归。在101～8080mg/L范围内，呈良好线性关系。回归方程：A=09256C-09890，r=09996。　　按处方的配比制备空白脂质体，加入含处方量GA对照品溶液的容量瓶中，以无水甲醇破乳，并稀释定容，使药物浓度分别为101、1020、8080mg/L，按2.3.1项下色谱条件进样测定峰面积并计算回收率。同法制备上述

8、溶液，于日内及日间测定峰面积并计算药物含量考察方法的精密度。结果显示：低、中、高浓度的方法回收率分别为(10013±032)%、(9923±034)%、(10124±012)%;低、中、高浓度的日内sR分别为058%、062%、035%，日间sR分别为071%、075%、061%。　　24包封率测定　　2