兔耳风提取物的抑菌作用研究

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1、兔耳风提取物的抑菌作用研究作者：葛菲　张晓伟　裴各琴　陈武　赖学文　刘庆华【摘要】目的比较不同极性溶剂提取铁灯兔耳风与杏香兔耳风成分对3种常见微生物的抑菌作用。方法采用水、70%乙醇、95%乙醇及醋酸乙酯等不同极性的溶剂提取；用管碟法测抑菌圈的大小进行抑菌实验，用两倍稀释法进行最小抑菌浓度的测定。结果极性大的溶剂所提取出的成分对细菌（金黄色葡萄球菌）有明显抑菌作用，杏香兔耳风水提取物的最小抑菌浓度为6.25%,铁灯兔耳风水提取物的最小抑菌浓度为3.13%。极性小的溶剂提取出的成分对霉菌（白色念球菌）有抑菌作用。结论不同极性的提取物抑菌作用各不相同。【关键词】兔耳风；提取物；抑菌作用

2、　　Abstract：ObjectiveToparetheeffectofdifferentpolarityextractingreagentsAinsliaeamacroclinidioidesandA.fragransonthreekindsofmonmicroorganisms.MethodsTheactivesubstanceAinsliaeainedbyadoptingthecupplatemethod.Theminimalinhibitoryconcentration(MIC)ethodintubes.ResultsTheextractsfromstrongpolari

3、tysolventhadobviousinhibitoryeffectonbacteria(Staphylococcusaureus),andtheminimalinhibitoryconcentrationofA.fragransacroclinidioidesacroclinidioidesHayata和杏香兔耳风A.fragransChamp.均采自江西婺源，并经笔者鉴定。　　2方法　　2.1铁灯兔耳风提取物的制备　　2.1.1水提物　　将铁灯兔耳风剪碎后，用粉碎机适当粉碎，称取200g粉碎后药材置于5000ml烧瓶中，加入蒸馏水，浸泡30min。置电热套中缓缓加热至沸，并保

4、持微沸状态4h，停止加热，趁热过滤，将水提液浓缩为浸膏。　　2.1.2醇提物　　称取粉碎铁灯兔耳风药材100g置于烧瓶中，加入95%乙醇，浸泡30min，回流提取2次，第1次2h，第2次1.5h。过滤，合并滤液。回收乙醇，将滤液浓缩至浸膏状。同法可得70%乙醇提取物。　　2.1.3酯提物　　称取粉碎铁灯兔耳风药材100g置于1000ml烧瓶中，加入500ml醋酸乙酯，浸泡30min。回流提取2次，第1次2h，第2次1.5h。过滤，合并滤液。回收醋酸乙酯得浸膏。　　2.1.4样品制的制备　　样品液的制备将铁灯兔耳风的4种提取物配制成含生药量为50g/100ml的样品液。　　2.2杏香

5、兔耳风提取物的制备　　2.2.1水提物　　称取粉碎杏香兔耳风药材100g置于烧瓶中，加入蒸馏水，其余步骤同铁灯兔耳风水提法。　　2.2.2醇提物　　称取粉碎杏香兔耳风药材50g置于烧瓶中，加入95%乙醇，其它操作同铁灯兔耳风乙醇提取物提取法。用70%乙醇提取，其它操作同上，得70%乙醇提取物。　　2.2.3酯提物　　称取粉碎杏香兔耳风药材45g置于烧瓶中，其它操作同铁灯兔耳风醋酸乙酯提取物提取法。　　2.2.4样品液的制备　　将杏香兔耳风的4种提取物配制成含生药量为50g/100ml的样品液。　　2.3种菌的准备　　在超净工作台上将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌分别接种于各自

6、培养基上，在37℃恒温培养箱中培养48h。制成种菌备用。　　2.4培养基的准备　　取30.4g血琼脂培养基于锥形瓶中，加入800ml蒸馏水；取6.6g沙氏培养基及琼脂粉8g于锥形瓶中，加入400ml蒸馏水，与包扎好的培养皿、移液管、牛津杯、试管等一起放入灭菌锅中高压蒸气灭菌20min(103.4kPa)。　　2.5抑菌活性的测定　　培养基倒好平板后，冷却至凝固。用接种环挑取上述活化后菌种，涂满整个平板，盖好平皿盖，于培养箱中培养24h，制成含菌平板。然后在平板上等距离分散的轻轻放上4个牛津杯，在杯内分别注入100μl样品液。以上操作均在无菌室内进行。　　把每个处理过的培养皿放到如下

7、条件培养：细菌37℃，24h；霉菌24℃，48h。测定抑菌圈直径，取其平均值。并以此判断兔耳风不同溶剂提取物对供试菌的抑制效果。　　2.6最小抑菌浓度(MIC)的测定(两倍稀释法)　　根据抑菌圈的测定结果，选取金黄色葡萄球菌做最小抑菌浓度(MIC)的测定，选取杏香兔耳风和铁灯兔耳风的水、70%乙醇、95%乙醇提取物做为样品溶液。　　挑取金黄色葡萄球菌一环接种于肉汤培养基中，放入培养箱培养24h。取1支无菌试管倒入2ml肉汤，接种已培养24h的金黄色葡萄球菌一环，放入培