人参多糖对冷应激大鼠睾丸雄激素受体mrna表达及血浆睾酮的影响

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1、人参多糖对冷应激大鼠睾丸雄激素受体mRNA表达及血浆睾酮的影响：王洪军，冯立禇征于宁杨青张志强王立强吴益民【摘要】　　目的探讨人参多糖对冷应激大鼠生殖功能的影响，研究大鼠睾丸组织雄激素受体mRNA表达与血浆睾酮变化及人参多糖的调节作用。方法采用大鼠雄激素受体（AR）cDNA探针斑点杂交法检测雄激素受体mRNA表达强度，血浆睾酮含量测定采用放射免疫分析法。结果对照组睾酮含量为（10.93±1.44）nmol·L-1，冷应激实验组为（6.06±1.78）nmol·L-1，冷应激人参多糖实验组为（8.01±

2、1.38）nmol·L-1。实验组与对照组比较，差异显著（P＜0.05）。Dot–blot杂交结果：冷应激实验组明显弱于对照组，冷应激加人参多糖实验组弱于对照组但强于冷应激实验组。结论冷应激使睾酮水平下降，雄激素受体mRNA表达信号减弱，人参多糖可促进冷应激条件下的睾酮生成，加强雄激素受体mRNA表达。【关键词】冷应激人参多糖斑点杂交雄激素受体　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofginsengpolysugaronthemRNAexpressionoftesti

3、stissueandrogenreceptorandplasmatestosteronechangeaftercoldstress.MethodsRatsentgroupandcoldstressginsengpolysugargroup,testistissueandrogenreceptormRNAexpressioninedbyratandrogenreceptorcDNAprobedotblotting.Testosteroneinedbyradioimmunoassaykit(RIAkit)

4、.ResultsThecontentoftestosterone（nmol/L）entgroup,8.01±1.38incoldstressginsengpolysugargroup.ThereRNAexpressionofandrogenrecepterincoldstressgrouporethanthatincoldstressgroup.ConclusionTestosteronehasidenticalchangeRNAexpression,ginsengpolysugarhasupregu

5、lationactionforandrogenreceptormRNAexpression,andpromotetestosterone.　　KeyRNA表达结果，检测了血浆睾酮含量及人参多糖抗冷应激的生物学效应。现报道如下。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1动物体重250～300g成年健康雄性大鼠，购自中国医科大学实验动物中心，在本实验室分笼饲养，颗粒饲料，自动饮水，适应1周后进行冷应激实验。　　1.1.2试剂与仪器　　肝素购自Sigma公司，EDTA、乙醚与氯化钠购自沈阳化学试剂公司，睾

6、酮放射免疫分析试剂盒购自北京北方生物技术研究所。二甲苯、PPO、POPOP、HCl、NaOH等均为分析纯。CO2培养箱，美国Shel-Lab公司产品，型号1815TC；超净工作台，江苏苏州安泰空气技术有限公司产品，型号S-3Zf(-)质粒中，JM109宿主菌由郭志儒博士惠赠。常规方法［5］制备感受态宿主菌，并将大鼠ARcDNA重组质粒转入感受态菌中，经蓝白筛选，确定含有ARcDNA重组质粒的转化菌。根据小量扩增的电泳行为，将含有重组质粒的阳性菌大量扩增、酶切、纯化、电泳定量，制备出大鼠ARcDNA片段

7、。应用“随机引物法”，以［α-32P］dCTP标记大鼠ARcDNA片段，作为杂交探针。取大鼠ARcDNA片段（50ng）2μl，煮沸变性2min，冰浴。依次加入下列成分：5×上样缓冲液10μl，混合未标记的dNTP(dATP、dGTP、dTTP各1μl)2μl，BSA(10mg/ml)2μl，［α-32P］dCTP(50μCi,3000Ci/mmol/L)5μl，klenoin，煮沸2min，冰浴，加0.5mol/LEDTA2μl，备用。　　核酸杂交：各实验组与相应对照组取等量的睾丸组织总RNA进行1

8、%变性琼脂糖凝胶电泳。然后，转移至尼龙膜上，转移时间18～24h，80℃干烤2h，预杂交和杂交在下列条件下进行，将载有RNA样品的尼龙膜在42℃与预杂交液充分接触，预杂交液为6×SSC，50%甲酰胺，5×Denhardt’s液(1mg/mlBSA，1mg/ml聚蔗糖，1mg/ml聚乙烯吡咯烷酮)，100μg/ml的变性鲑精DNA，0.5%SDS。2h后，弃去预杂交液，将上述杂交液与探针同时加到杂交袋内，42℃振荡水浴24h。杂交后，从杂交袋中取出尼龙膜，