平痫冲剂对ptz致痫大鼠中枢神经系统 nmdar

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1、平痫冲剂对PTZ致痫大鼠中枢神经系统NMDAR【摘要】目的:探讨平痫冲剂抗癫痫的机制。方法:腹腔注射戊四唑制成慢性癫痫模型,通过免疫组织化学方法和显微图像分析技术检测大鼠颞叶及海马齿状回的谷氨酸受体(NMDAR1)和γ-氨基丁酸受体(GABAARα1)免疫反应的阳性细胞数(n)、阳性细胞面积比(Aa%)及阳性细胞积分吸光度(IA)。结果:(1)与正常对照组比较,模型组颞叶及齿状回NMDAR1的阳性细胞数、阳性细胞面积比上升,阳性细胞积分吸光度增加(P<0.01);而西药治疗组及中药小、中、大剂量组与模型组比较,颞叶及齿状回

2、的NMDAR1阳性细胞数、阳性细胞面积比都有不同程度地下降,阳性细胞积分吸光度也有不同程度地减少(P<0.01)。(2)与正常对照组比较,模型组颞叶及齿状回GABAARα1阳性细胞数、阳性细胞面积比下降,阳性细胞积分吸光度降低(P<0.01);而西药治疗组和中药小、中、大剂量组与模型组比较,颞叶及齿状回的GABAARα1阳性细胞数、阳性细胞面积比都有不同程度地增加,阳性细胞积分吸光度也有不同程度地升高(P<0.01)。结论:平痫冲剂抗癫痫的作用机制可能是通过抑制颞叶及齿状回兴奋性神经递质受体NMDAR1的活性与表达,并激活

3、其抑制性神经递质受体GABAARα1的活性与表达,从而降低大脑皮质的兴奋性,有效抑制癫痫的形成及发展。【关键词】癫痫平痫冲剂PTZ点燃型癫痫大鼠模型NMDAR1GABAARα1癫痫是一种常见的慢性脑部疾病,全世界约有4千万人受累。我国癫痫的患病率约为3.3‰~5.8‰,其中儿童癫痫的发病率约为成人的10倍,且半数以上在10岁以内起病[1]。该病严重影响患者的生活、工作、学习,且可能在发作时遭遇危险而危及生命,还会伴有一系列复杂的社会心理问题,给患者、家庭及社会带来很大负担[2]。因此如何正确、有效地防治癫痫已成为医学界尤其

4、是儿科界广泛关注的问题。平痫冲剂为恩师张士卿教授依据中医理论,凭借多年临床经验总结所得,并经长期的临床运用,证明确有疗效。本实验通过检测大鼠颞叶氨基酸类神经递质受体的含量,来探讨平痫冲剂对癫痫的治疗效果及作用机理,为临床治疗提供更科学、更确切的理论依据。1实验材料戊四唑(PTZ),用前以生理盐水配制成质量浓度为2.5mg/mL的溶液;平痫冲剂(胆南星、僵蚕、天麻、代赭石、石菖蒲、丹参、白芍等),用时煎煮浓缩;苯巴比妥,质量浓度为1.03mg/mL。2实验方法2.1动物分组将60只28d龄的Wistar大鼠,质量(70±10

5、)g,雌雄各半(甘肃省实验动物研究中心提供,医动字第14-007号),适应性饲养4d后,随机分为6组,分别为:正常对照组、模型组、西药治疗组、中药小剂量组、中药中剂量组、中药大剂量组。2.2模型制备除正常对照组外,其余5组均造模,方法参考徐国龙等[3]癫痫模型的制备,即用PTZ亚惊厥剂量32mg/kg,用前以生理盐水配制成质量浓度为2.5mg/mL的溶液,腹腔注射,每日1次,持续4周后停药1周,再用相同剂量的PTZ测试。凡显示连续5次Ⅱ级以上惊厥的,则视为达到点燃标准,Ⅳ~Ⅵ级的痫性行为被视为充分点燃。大鼠惊厥发作采用7点

6、评分法[3]。0级:没有行为上的发作;Ⅰ级:节律性点头或头部颤搐;Ⅱ级:阵挛性咀嚼;Ⅲ级:头部颤搐加前肢阵挛性抽搐;Ⅳ级:袋鼠姿势(上身直立);Ⅴ级:跌倒;Ⅵ级:全身强直阵挛性惊厥。另外,正常对照组给予相同剂量的生理盐水。2.3给药方法造模成功1d后,除正常对照组和模型组外,其余各组开始灌服药物。平痫冲剂用时煎煮浓缩,灌胃剂量按人与大鼠体表面积比[4],折算成大鼠等效剂量,每日按4mL灌服平痫冲剂水溶液,质量浓度分别为低剂量组1.4g/mL、中剂量组3.3g/mL、高剂量组6.7g/mL,西药治疗组每日按4mL灌服质量浓度

7、为1.03mg/mL的苯巴比妥,正常对照组和模型组灌服等体积的生理盐水。每日灌胃1次,连续灌胃3周。2.4灌注与取材6组大鼠在相同条件下用乙醚吸入麻醉,四肢固定在手术板上,开胸,暴露心脏,直视下将穿刺针经左心室刺入,并以止血钳固定,然后剪开右心耳,随即用4℃预冷的生理盐水250mL快速灌注,再灌注含40g/L多聚甲醛的0.1mol/L磷酸盐缓冲液500mL。先灌注再改为滴注,调节滴速,先快后慢,共滴注1h。观察大鼠全身僵硬后,迅速开颅取出完整大脑,去除脑干及小脑部分,将修整后的脑组织块置于上述滴注液内,4℃过夜,再置于20

8、0g/L蔗糖中12h。然后每个大脑半球于背侧海马最大断面处切取3mm厚的组织,要求该组织必须含有大鼠颞叶组织。随后制成石蜡包块,再做冠状切片,厚度为4μm。2.5免疫组化染色(SABC法)石蜡切片常规脱蜡,室温下放入H2O2稀释液中10min后,滴加复合消化液8min,再滴加5%BSA封闭液20min,

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