前列腺素e1脂质体对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的保护作用

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1、前列腺素E1脂质体对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的保护作用【摘要】目的考察前列腺素E1脂质体(LipoPGE1)对大鼠离体心肌缺血再灌注(IR)损伤的保护作用。方法将24只大鼠随机分成3组，LipoPGE1治疗组，PGE1治疗组及对照组(IR组)，治疗组给予含药停搏液，对照组单纯给KH液;37℃下建立心肌IR模型，预灌注15min，缺血40min，再灌注40min，分别测量复灌20min、复灌40min时心功能指标：心率、左室收缩压(LVDP)、左室舒张末压(LVEDP)、心室内压最大变化速率(±dp/dtmax)及磷酸激

2、酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)浓度。结果LipoPGE1治疗组±dp/dtmax的恢复率较PGE1组大(P<0.01)，LDH浓度在复灌20和40min时明显低于IR组(P<0.01)。而PGE1组复灌20和40min时CPK释放量低于IR组而高于LipoPGE1治疗组，说明PGE1能部分抑制再灌注期CPK的漏出而脂质体包裹能增强这种效应。结论LipoPGE1对实验性心肌IR损伤有保护作用。【关键词】前列腺素E1脂质体;心肌缺血再灌注损伤;磷酸激酶;乳酸脱氢酶前列腺素E1(PGE1)具有舒张血管，抑制心肌

3、多核中性粒细胞(PMN)及血小板的聚集和活化，稳定生物膜和细胞保护等作用，广泛用于治疗闭塞性动脉硬化、心肌缺血、休克等多种疾病〔1〕。我室与某生物技术公司合作，利用开逆向蒸发法及MFIC技术成功制备粒径大小适合，且均匀、包封率达到90.0%以上的PGE1脂质体(LiposomalPGE1，LipoPGE1)。本研究观察了预灌注LipoPGE1对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响，观察LipoPGE1对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用。　　1材料与方法　　1.1实验动物成年SD大鼠24只，200～250g，雌雄各半，由第

4、三军医大学野战外科研究所动物中心提供。　　1.2主要药品试剂LipoPGE1由本单位合作制备，PGE1针剂为重庆药友制药有限责任公司产品(博乐斯)，批号040601。　　1.3方法　　1.3.1灌流液的配制改良的KrebsHenseleit(KH)液组成成分(单位：mmol/L)：NaCl118.9，KCl4.69，CaCl22.2，MgSO41.17，KH2PO41.17，NaHCO317.9，EDTA0.03，Glucose9.99。先以超纯水配制成含NaCl、KCl、MgSO4、KH2PO4、NaHCO3、EDTA

5、的母液，使用时稀释母液加入CaCl2和Glucose配制成所需浓度。　　1.3.2模型制作用3%戊巴比妥钠(0.1ml/100g)腹腔注射麻醉后将大鼠背位固定,切开腹腔，下腔静脉注入3%浓肝素(0.1ml/100g)以防血栓形成。迅速开胸剪去胸廓，暴露心脏及大血管，剪断肺静脉。迅速取出心脏，在预冷(4℃)改良的KH液中作主动脉插管,距主动脉根部3～4mm处剪一小口，插入内径约3mm的聚乙烯套管并结扎，再置于37℃保温灌流室内。另将导管插入心尖处左心室内，经换能器连在生理多导记录仪上，于Langendorff心脏灌流装置主动脉

6、逆行灌注KH缓冲液预灌流15min，以冲洗残留于心脏的血液，灌流液恒温(37℃)。恒压(60mmHg),并为100%O2饱和。缺血40min，再灌注40min。　　1.3.3分组及用药随机将24只大鼠分成3组，LipoPGE1治疗组，PGE1治疗组及对照组(IR组)，每组8只，IR组继续灌注KH液，治疗组自预灌流15min持续灌注含药物0.5μmol/L的KH液。　　1.3.4心功能指标的测定利用二通道生理记录仪分别测量各组缺血前、复灌20min、复灌40min时心功能指标：心率(Rate)、左室收缩压(LVDP)、左

7、室舒张末压(LVEDP)、心室内压最大变化速率(±dp/dtmax)。　　1.3.5生化指标检测分段收集流出液(缺血前、复灌20min、复灌40min)，用4℃冷玻璃瓶收集冠脉流出液1～2ml，采用乳酸测定法测定心肌乳酸脱氢酶(LDH)活性，荧光分光光度法测定磷酸激酶(CPK)活性。　　1.3.6心肌超微结构的考察实验结束时，取左前壁心尖上方5mm处的心肌组织，立即投入预冷的2.5%戊二醛固定，经PBS漂洗，10%四氧化锇固定后,用不同浓度的酒精梯度脱水，再用丙酮脱水，100%丙酮与纯包埋剂1∶1混合包埋,加温聚合,定位修块，

8、LKBV型超薄切片机切片，醋酸铀、柠檬酸铅电子染色，用透射电镜(H300)观察超微结构的变化。　　1.4统计学处理数据以x±s表示,采用SPSS11.5软件包对IR组进行随机分组设计的方差分析，对IR组、LipoPGE1组、PGE1组数据进行单因素方差分析及多重比较q检验。