曲克芦丁与牛血清白蛋白相互作用的光谱研究

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1、曲克芦丁与牛血清白蛋白相互作用的光谱研究：孙荣梅，于丽燕，陈昌云【摘要】目的：应用光谱技术研究曲克芦丁(troxerutin,TRO)与牛血清白蛋白(bovineserumalbumin,BSA)间结合作用机制。方法：通过荧光光谱法确定曲克芦丁对BSA的荧光猝灭机制。依据热力学参数讨论两者之间的主要作用力类型。利用同步荧光光谱考察曲克芦丁对BSA构象的影响。结果：曲克芦丁对BSA的荧光猝灭机制为静态猝灭;反应的热力学参数ΔH=-77.06KJ/mol，ΔS=-152.20J/(mol·K)。结论：曲克芦丁与BSA之

2、间的主要作用力是范德华力;曲克芦丁的加入使BSA构象发生了变化。【关键词】牛血清白蛋白;曲克芦丁;荧光猝灭;同步荧光光谱　　[Abstract]Objective:Appliedspectroscopytostudytheinteractionmechanismoftroxerutinandbovineserumalbumin(BSA).Methods：FluorescencespectroscopymethodinethefluorescencequenchingmechanismofBSAcausedbytro

3、xerutin.Accordingtothethermodynamicparametersthemajorforcetypesbetalbuminetry.Results：Thequenchingmechanismoftroxerutintobovineserumalbuminodynamicparametersofthereactionol，ΔS=-152.20J/(mol·K).Conclusion：Themainbindingforcebetalbumincouldchangetheserumproteinc

4、onformation.　　[Keyalbumin;troxerutin;fluorescencequenching;synchronousfluorescencespectroscopy　　曲克芦丁(troxerutin,TRO)系芦丁经羟乙基化制成的半成品黄酮化合物。具有抑制红细胞和血小板凝结，防止血栓形成的作用;同时能增加血中氧的含量，改善微循环，促进新生血管形成以增进侧支循环的开放[1]。结构见图1。血清白蛋白是血浆中含量最丰富的载体蛋白，它能和许多内源性物质广泛结合。各种药物进入人体一般都要通过血浆的贮存

5、和运输，而后才能到达受体部位并发生药理作用。　　研究药物与血清白蛋白的相互作用具有重要的理论意义[2]。蛋白质的功能与其结构密切相关，研究中药有效成分对蛋白质结构的影响，不仅能为确定中草药有效成分及作用强度提供一定信息，而且对全面阐明小分子化合物与蛋白质的结合机制也有重要意义，同时也有利于了解中药的作用机制。本文研究了TRO与牛血清白蛋白(bovineserumalbumin，BSA)的作用机制以及温度对结合常数的影响。分析了TRO与BSA的结合模式，从分子水平认识该反应的作用机制。　　图1曲克芦丁的结构　　Fig

6、1Thestructureoftroxerutin　　1材料与方法　　1.1仪器和试剂　　TU1901PC型分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)，LS50B型荧光分光光度计(美国PerkinElmer公司)，PHS25型PH计(上海雷磁仪器厂);TRO(中国药品生物制品检定所),牛血清白蛋白(Sigma公司);三羟甲基氨基甲烷(Tris)、盐酸、氯化钠等试剂均为分析纯;实验用水为二次蒸馏水。　　1.2溶液配制　　用0.9%NaCl配成pH=7.4的TrisHCl缓冲液来配制浓度为1.0×10-3mol/

7、L的TRO储备液备用;以TrisHCl缓冲溶液(pH=7.4，含0.1mol/LNaCl以维持溶液的离子强度)为溶剂配制1.0×10-4mol/L的BSA储备液备用。　　1.3实验方法　　荧光光谱的测定：取3ml1.0×10-6mol/L的BSA溶液于1cm的石英比色皿中，用微量注射器逐次加入浓度为1.626×10-3mol/L的TRO溶液进行滴定，加样体积由实验点浓度计算确定(滴定剂累加体积小于100μl)。以278nm为激发波长，绘制300～500nm波长范围的荧光光谱;同步荧光光谱实验中同时扫描激发和发射单

8、色器，固定激发和发射波长差分别为60nm和20nm，其他同荧光光谱测量。　　紫外吸收光谱的测定：移取10ml1×10-4mol/L的曲克芦丁溶液于10ml比色管中,加入pH=7.4的TrisHCl缓冲溶液定容至刻度,以TrisHCl缓冲溶液做参比,测定紫外吸收光谱。　　2结果　　2.1紫外光谱的研究　　由BSA,TRO及TROBSA(1∶1)复合体系的