柑橘试管内微芽嫁接方法探讨

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1、园林植物组织培养精品课程柑橘试管内微芽嫁接方法探讨刘文龙李进进陈升云翟华东李志龙李果安黄维清吴锦强陈永炽李海滔卢欣（广东轻工职业技术学院食品系园林工程专业，广东广州510300）摘要：目的：通过试管内微芽嫁接获得无病毒柑橘种苗。方法：用酸橙种子经消毒后在试管内播种作为砧木来源，采用还没有自剪的优良柑桔品种的嫩梢，取其一定大小的茎尖作为接穗进行试管内嫁接。结果：在种子消毒过程中，用75%酒精10s+NaClO8min+HgCl210min的效果明显比其它三种消毒方法污染率低；在接种过程中，去除外壳

2、的种子萌芽率最高；接穗的消毒用NaClO10min+HgCl28min的消毒方法污染率较低。结论：茎尖微芽嫁接技术若与柑橘常规育种、体细胞杂交等技术结合起来，在柑橘种苗生产中将会发挥越来越大的作用。关键词：柑橘；接穗；微芽嫁接柑橘病毒病及类病毒病的危害很大，已蔓延于全世界，目前经正式鉴定已确认有15—20种此类病害。广东省汕头地区的椪柑、蕉柑，每年因黄龙病枯死40万株；裂皮病已在四川、湖南、广西、广东、浙江、福建、湖北蔓延；青果病在广西亦很猖獗。我国于70年代初对茎尖组织培育进行了初步实验，为防

3、止柑桔病毒危害提供了有效途径。采用离体培养与嫁接结合的茎尖微芽嫁接技术可排除病毒培育无病毒苗木，其步骤是：砧木试管内播种——茎尖微芽嫁接——嫁接苗试管培养——移栽或转接——转接苗培育-----脱病毒结果鉴定。“微芽嫁接”是现今解决这一难题的一个最有效的途径之一，本实验对这一技术进行了研究和探讨。1.材料与方法1.1．实验材料与试剂(1)实验材料：酸橙种子；柑桔嫩芽。(2)实验试剂（消毒剂）：酒精75％；NaClO2％（体积比）；HgCl21mg/L（以下免浓度及单位）1.2实验方法1.2.1．培

4、养基的制备（1）培养基母液的配制园林植物组织培养精品课程用于植物组织培养的培养基中，要求含有各种无机盐、有机物和植物激素等成分，如果每次配培养基都逐个地称量则很浪费时间，而且有些成分用量极少，称量极小的重量既浪费时间，又不准确。因此，在配置培养基时，为了方便和减少误差，首先把培养基中的各种成分配成一定浓度的溶液，即培养基母液，然后根据培养基配方、母液浓度和需要配制培养基的体积来计算所需母液的体积，用量筒和取样器量取即可。以下为大量元素、微量元素、有机成分的组成及配比：大量元素的配比（10XMS）

5、无机盐取量KNO319gNH4NO316.5gMgSO4·7H2O3.7gKH2PO41.7g以上置入500ml烧杯中，充分溶解。而CaCl2·2H2O4.4g或无水CaCl23.31g充分溶解后倒入上述溶液中定容成1000ml即成10XMS。有机成份配比（100X）有机盐取量肌醇5000mg甘氨酸100mg烟酸25mgVB125mgVB625mg配成500ml成100X有机母液微量元素配比（100X）园林植物组织培养精品课程无机盐取量MnSO4·4H2O或MnSO4·H2O2230mg或169

6、0mgZnSO4·7H2O860mgH3BO3620mgKI83mgNaMoO4·2H2O25mgCuSO4·5H2O2.5mgCoCl2·6H2O2.5mg（2）培养基的配制玻璃器皿充分清洗→干燥↓量取母液→加入3%的蔗糖→定溶→pH调整（5.6-5.8）→煮沸→加入琼脂→分装→灭菌→冷却→凝固→接种（嫁接）1.2.2种子的消毒及接种选取饱满的酸橙种子用酒精、NaClO、HgCl2进行了不同消毒时间的对比实验。消毒方法有：（1）酒精10s+NaClO10min+HgCl28min（2）酒精10

7、s+NaClO10min+HgCl212min（3）酒精10s+NaClO8min+HgCl28min（4）酒精10s+NaClO8min+HgCl210min用镊子将消毒好的种子接种到已准备好的培养基中，注意接种时，使培养瓶成一定的倾斜度，使手拿镊子的接种过程不直接在培养基上方进行，以减少污染机会。为了能让种子有足够的空间生长，每瓶接种3粒，尽量避免把种子埋于培养基内。然后将培养瓶放置于培养架上培养，条件：23℃-25℃，遮光培养，直到萌发时再置于光照下。1.2.3种子接种时不同的处理形式为了

8、提高种子萌芽率，我们对种子采用了三种接种处理方式：（1）不做任何处理；（2）刨去外部硬核园林植物组织培养精品课程（3）使用种胚1.2.4微芽嫁接方法选取还没有自剪的优良观赏柑桔品种嫩芽作为材料，切取约0.7mm的茎尖进行嫁接。（1）选取生长健壮的嫩芽用自来水冲洗干净，放于烧杯中在接种室的超净工作台上，采用两种消毒方式，消毒后用无菌水冲洗3-4次：①酒精10s+NaClO8min+HgCl26min②NaClO10min+HgCl28min（2）嫁接：作为对比实验，采用三种方式嫁接：①直接在培养瓶