海洋浮游生物学实验指导2008

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1、海洋浮游生物学实验指导实验室规则和显微镜的镜检方法……………………………………………1实验一藻类细胞的观察与计数………………………………………………2实验二藻类细胞大小的测定…………………………………………………4实验三微藻的分离培养………………………………………………………6实验四浮游动物的观察1……………………………………………………12实验五浮游动物的观察2……………………………………………………13实验六浮游动物的观察3……………………………………………………16附录水生生物的基本调查方法……………………………………………17实验室规则    1．实验课前必须预习实验内容，实验课不得无

2、故迟到、早退、旷课。   2．实验时做到细致，认真，避免吸烟，随地吐痰，大声喧哗。   3．爱护公物，不随便动用实验室的仪器，标本。若损坏器材，立即向老师登记，若要借用实验器材，须征得老师同意。4．每次实验后，须交实验报告，将所用器材擦洗干净，放回原处，值日生要负责清洁工作。 显微镜的镜检方法    显微镜的使用在基础课已经熟悉，不必赘述，观察浮游生物标本，镜检方法如下：   1．制片   （1）在制片前先将盖玻片、载玻片擦干净，用吸管吸取器皿中的标本液，滴一滴于载玻片上，然后用镊子将盖破片沿着水珠的边缘慢慢放下，若发现标本液溢出或盖玻片内有气泡时，应将标本液吸回到器皿中，擦净载玻片和盖玻片，

3、重新制片，直至水滴恰好在盖玻片内，并无气泡出现为止。26   观察丝状藻类时，先用镊子取3-5根藻丝放置于载玻片上，用解剖针将藻拨弄均匀，然后吸一滴水，盖上盖玻片即可观察。   （2）每次使用显微镜之前，首先检查镜子的各机械部分和镜头是否有毛病，如发现有毛病立即向老师报告，及时进行处理。   （3）在使用显微镜之前、之后必须按显微镜的保养方法把它擦干净。   2．镜检步骤将做好的片子置于载物台上，用物镜的低倍、中倍、高倍依次检查。注意：在用高倍镜头观察时，只需用微调旋钮，以免镜头压坏盖玻片而粘水，引起镜头发霉以至影响使用效果和寿命。实验一 藻类细胞的观察与计数 （一）实验的目的和要求  显微镜

4、下观察并识别几种常见海洋微藻的主要形态特征，识别常见种类。了解血球计数板的计数原理，掌握血球计数板的计数方法。（二）原理利用血球计数板在显微镜下直接进行测定。它观察在一定的容积中的藻类细胞的个体数目，然后推算出藻类细胞密度。计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽构成三个平台，中央平台又由一短槽隔成两半，其上各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数室。计数室刻度有2种：一种是25中格X16小格，而另一种为16中格X25小格，它们都是由400个小格组成。每个大方格边长为1mm，则每个大方格面积为1X1=1mm2。盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间高度为0.1mm

5、,所以每个计数室的体积为0.1X1X1=0.1mm3,每个大格有400个小格，所以每个小方格体积为0.1/400=1/4000mm3=1/4000,000ml。   （三）实验器材及药品   显微镜、载玻片、盖玻片、解剖盘、解剖针、小镊子、吸管、培养皿、纱布、擦镜纸、鲁格氏液、自备实验报告纸及绘图铅笔（H、2H），橡皮等。   （四）方法与步骤261、用血球计数板测定藻细胞的数量2、检查血球计数板取血球计数板一块，先用显微镜检查计数板的计数室，看其是否沾有杂质或干涸着的细胞，若有污物则通过擦洗、冲洗，使其清洁。镜检清洗后的计数板，直至计数室无污物时才可使用。3、稀释样品将培养后的藻培养液振荡振

6、摇混匀，然后作一定倍数的稀释。稀释度选择以小方格中的分布的细胞清晰可数为宜。一般以每小格内含4～5个细胞的稀释度为宜。4、加样取出一块干净盖玻片盖在计数板中央。用滴管取1滴藻培养液稀释悬液注入盖玻片边缘，让藻液自行渗入，计数室内不能有气泡，若藻液太多可用吸水纸吸去。静置5—10分钟。对于具鞭毛运动迅速种类，应先用鲁格试液固定，摇匀再取样。5、镜检待细胞不动后进行镜检计数。先用低倍镜找到计数室方格后，再用高倍镜测数。一般应取上下及中央五个中格的总藻数。计数时若遇到位于线上的菌体，一般只计数格上方（下方）及右方（左方）线上的细胞。计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的细胞。每个样品重复3次。6

7、、计算取以上计数的平均值，按下列公式计算出每毫升藻液中的含藻量。样品中细胞数/ml=每中格平均细胞数x25x10000x稀释倍数（采用25x16规格）。7清洗计数板用毕后先用95%的形酒精轻轻擦洗，再用蒸馏水淋洗，然后吸干，最后用擦镜纸揩干净。若计数的样品是病原微生物，则须先浸泡在5%石炭酸溶被中进行消毒，然后再行清洗。清洗后放回原位，切勿用硬物洗刷。8、思考1、能否用血球计数板在油镜下进行计数？