分解纤维素的微生物的分离2013.ppt

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1、课题3分解纤维素的微生物的分离纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。纤维素能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。一、课题背景草食性动物是怎样消化食物中纤维素的？胃中生活着大量分解纤维素的微生物，能产生纤维素酶，将纤维素分解成葡萄糖。是自然界中纤维素含量最高的天然产物，纤维素的分解需要在的催化作用下完成。二、基础知识（一）纤维素与纤维素酶棉花纤维素酶纤维素酶是一种，一般认为它至少包括三种组分，即、CX酶和，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄

2、糖。纤维素纤维二糖葡萄糖C1酶Cx酶葡萄糖苷酶复合酶C1酶葡萄糖苷酶滤纸崩溃法体会纤维素酶作用的实验：①取二支20mL的试管实验：纤维素酶分解纤维素的实验②各加入一张滤纸条③各加入pH4.8，物质量为0.1mol/L的醋酸－醋酸钠缓冲液11ml和10ml甲乙④在乙试管中加入1mL纤维素酶⑤两支试管固定在锥形瓶中，放在140r/min的摇床上振荡1h⑥结果：乙试管的滤纸条消失讨论：乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是什么？（二）纤维素分解菌的筛选1、筛选纤维素分解菌的方法是______________。该方法可以通过

3、________反应直接筛选。刚果红染色法颜色2、其原理是：刚果红可以与纤维素形成____________，当纤维素被_________分解后，红色复合物无法形成，出现以_____________为中心的________，我们可以通过____________来筛选纤维素分解菌。红色复合物纤维素酶纤维素分解菌透明圈是否产生透明圈练一练：1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是A.纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种B.纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖C.纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁D.葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖2.利用刚果

4、红染色法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是A.刚果红能与纤维素形成红色复合物B.刚果红能与纤维二糖形成红色复合物C.刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物D.若培养基上产生了透明圈，则说明已筛　选出了纤维素分解菌土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落三、实验设计（操作流程）（此步可省略）本实验流程与课题2中的实验流程有哪些异同？课题2是将土样制成的菌悬液直接涂布在以尿素为唯一氮源的选择培养基上，直接分离得到菌落本课题通过选择培养，使纤维素分解菌得到增殖以后，再将菌液涂布到选择

5、培养基上。〖旁栏思考题〗纤维素分解菌大多分布在_________的环境中。采集土样时，应选择富含纤维素的环境。如树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等等。也可将滤纸埋在土壤中一个月左右，这样会有能分解纤维素的微生物生长。【资料一】土壤取样富含纤维素①分布环境:1、土壤取样：富含纤维素的环境中操作步骤生物与环境的互相依存关系，在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土壤中获得目的微生物的几率要高于普通环境。②原因:③实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等。④讨论:如果找不到合适的

6、环境，可以将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋在土壤中多深？将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm左右的土壤中。〖旁栏思考题〗为什么要在富含纤维素的环境中找纤维素分解菌？在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高1、纤维素分解菌选择培养基属于______（固体、液体）培养基，原因是____________________。【资料二】选择培养液体没有添加琼脂成分2、选择培养增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离

7、所需要的微生物。①目的：②制备选择培养基：③操作：将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震荡培养1～2天，直至培养液变浑浊。也可重复选择培养。培养基成分分析培养基组成提供主要的营养物质纤维素粉5g碳源（能源）NaNO31g氮源、无机盐KCl0.5gNa2HPO4·7H2O1.2gKH2PO40.9gMgSO4·7H2O0.5g无机盐酵母膏0.5g生长因子、碳源、氮源水解酵素0.5g氮素、生长因子溶解后，蒸馏水定容至1000mL水2、该培养基对微生物________（具有，不具有）选

8、择作用。如果具有，其选择机制是_______________________________________________________。以纤维素粉为唯一碳源，能分解纤维素的微生物可以大量繁殖具有按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释101～107倍。3.梯度稀释101102103104105