细胞培养常用水和平衡盐溶液的配制方法.doc

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1、细胞培养常用水和平衡盐溶液的配制方法关键词：细胞培养基ATCC北纳细胞网一、水水是细胞赖以生存的主要环境，营养物质和代谢产物都必须溶解在水中，才能为细胞吸收和排泄。而且，水溶液对维持细胞形态、进行生物化学反应、温度传导、调节渗透压和酸碱度的平衡都有着重要作用。体外培养细胞对水的质量很敏感，要求很高。水的纯度不够，即使混杂有一些含量极微的有害元素，有时也会对细胞产生不利的影响，甚至引起细胞中毒死亡。因此．配制培养液的水必须经过纯化。细胞培养实验室需要纯净的水，常可分为离子交换水和蒸馏水两种。前者由于仍然带有非离子物质和有机物，在组织培养中很少使用。组织培养必须使用玻璃蒸馏

2、器制备的三次蒸馏水；二次蒸馏水或外购的金属蒸馏器制的蒸馏水只能用于清洗器皿。蒸馏水的储存对保持水的质量有很大影响；周围环境和空气能使水污染或改变其pH，所以储存水的容器要尽量减少启开的次数，避免和外界过多接触，存放时间不宜太长，一般不要超过两周，最好现制现用。二、平衡盐溶液(balancedsaltsolution，BSS)1．BSS种类：BSS是从Ringer生理盐水发展起来的，主要由无机盐和葡萄糖组成。BSS中的无机离子不仅是细胞生命所需成分，而且在维持渗透压、缓冲和调节溶液的酸碱度方面，起着重要作用。BSS中含少量的酚红，作为溶液酸碱度变化的指示剂；溶液变酸时呈黄

3、色．变碱时呈紫红色，中性时呈桃红色，借此易于观察到培养液pH的变化。表2—8是几种常用BSS中的组成成分的比较。Hanks液和Earle液是配制各种培养液最常用的基础溶液，它们的主要区别在于缓冲系统不同。Hanks液缓冲能力较弱，需利用空气平衡；Earle液含有高浓度的NaHCO3，缓冲能力较强，需用5％CO2平衡。钙、镁离子是细胞膜的重要组成成分，它们有促使细胞凝聚作用。因而配制离散细胞用的消化液和细胞洗涤液时．宜采用钙、镁离子含量低的Dulbecco液和无钙镁离子的D-Hanks液或PBS液。2．BSS的配制方法：配制BSS时主要应避免钙、镁离子的沉淀，下面以Han

4、ks液为例说明其配制方法。(1)按成分表准确称量试剂。许多试剂是含有水分的水化物，与不含水分试剂的称量不同．应加以换算。(2)将CaCl2先溶解在100ml水中。(3)其他成分依次溶解于750ml水中(注意应待前一种试剂完全溶解后，再溶解下一种成分)。(4)用数滴5．6％NaHCO3溶液溶解酚红。(5)将(2)缓慢倒人(3)中，并不时搅动，防止出现沉淀：(6)将(4)加入(5)中。(7)将(6)移人答量瓶中，三蒸水定容至1000ml。(8)分装瓶中，8磅10min高压蒸气灭菌，4℃冰箱内保存。按上述方法也可配制成10×浓度的储存液，在储存液内加少许三氯甲烷(2~3ml)

5、防腐；三氯甲烷在高压灭菌时可挥发掉，不影响使用；加三氯甲烷后要用力混匀，在室温或4℃储存。用时按比例稀释，滤纸过滤后分装入瓶中，包装高压灭菌后，于无菌条件下，换上无菌胶塞，置冰箱中保存备用。如液体出现浑浊或沉淀时，应重新配制。