卫生化学实验总结-预防医学教学内容.doc

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1、卫生化学实验总结-预防医学精品文档ICP发射光谱测头发样品中的元素【试剂和仪器】中性洗发液、丙酮、无水乙醇、混合酸、去离子水，钙铁锌标准品。100ml烧杯2只，10ml比色管1个，玻璃棒，剪刀，电子天平，烘箱，滤纸。日本岛津公司ICPS-7000型电感耦合等离子体原子发射光谱仪，高纯氩气，通风装置，循环水系统，容量瓶，移液管。【实验步骤】1、消化处理采样：后枕部头发距头皮1~3cm（为了反映近期金属元素蓄积的情况）样品量约为0.05g。洗涤：中性洗发液洗涤→蒸馏水洗净（约3-5遍）→去离子水洗至无泡沫→淋干后放在丙酮中浸泡2min（去除有机污染物）→无水乙醇中浸泡1

2、min→滤干→110℃干燥箱中干燥0.5h消化：精称取样品0.025g左右→混合酸5ml（10min）→电炉上徐徐加热（120℃左右）→溶液由棕褐色变至淡黄色，加大火，200℃左右赶酸（小于1ml为宜）。若为较深的黄色，则继续加数滴混合酸（完全冷却后）电炉上加热直至残渣为白色时消化完成。注：混合酸是为了增加氧化性（硝酸：高氯酸=4:1，适用于含钙较高的材料）；所有试剂为优级纯稀释：1%HNO3溶解后→去离子水少量多次（至少3次）将样品转移至10ml容量瓶中定容，摇匀。贴签备用（注：吸取硝酸和搅拌的吸管用两根，避免损失及污染）2、仪器基本操作方法（1）打开主机电源，预

3、热3h以上。（2）打开循环水装置，接通氩气，打开通风罩。（3）打开电脑，进入ICPS操作系统，首先观察仪器状态是否正常，点燃距焰，（此时毛细管不能空吸）吸入空白溶液，进行波长校正（通常使用O/C/Ar）。S<50，表示误差在允许范围内，若S>50,应重复校正一次。（4）然后建立新文件（makenewcard→命名→定性or定量→设一些参数,如测量次数，为3次，最后取平均值→选要测的元素→选波长→设置测量条件，采用人工方法进样，将样品提升时间设为0→设置标准系列样品浓度），根据测量需要设定条件。（5）测定标准系列和样品。（6）测定结束后，应先关闭氩气阀门，待距焰熄灭后

4、，再关闭电源。3、标准曲线的绘制（1）首先用浓度最高的混合标准溶液测定ATT值（告诉仪器最高浓度是多少，测完之后用纯水洗一下），然后依次测定不同浓度混合标准溶液中各元素的发射强度，测量结束后，仪器自动绘出标准曲线。4、发样的测定用与标准系列同样方法测定光强度，然后从标准曲线上查出发样中各元素含量。若某种元素浓度超过最高浓度限值，要进行稀释。【结果及公式】以c为横坐标，原子发射谱线强度（）为纵坐标，根据样品中各元素的从标曲中得到其浓度cx【注意事项】收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档器皿等玻璃器材不要随意放置，以免污染。进样：样品→毛细管→雾化器雾化→雾化室

5、进一步雾化→炬管→光学系统紫外分光光度法测定蛋白质的含量【实验原理】蛋白质分子结构中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，具有吸收紫外光的性质，其最大吸收波长为280nm左右。在一定实验条件下，蛋白质溶液的吸光度与其浓度符合Lambert–Beer定律，据此可对蛋白质进行定量分析。结构：光源→单色器→吸收池→检测器→显示系统注：此次试验用紫外光，所以选用石英比色杯。Q或者S表示石英的意思，放置时字母要朝同一个方向。比色杯为成对的，不能混用。【实验步骤】1.吸收光谱曲线的绘制：以生理盐水作参比，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，从200～400nm扫描任一牛血清白蛋白

6、标准液的吸收曲线并找出最大吸收波长（λmax）。2.标准曲线的绘制：移取5.00mg/ml牛血清白蛋白标准应用液0.00、0.50、1.00、1.50和2.00ml，分别置于10ml比色管中，用生理盐水稀释至刻度，摇匀。以生理盐水作参比，在λmax波长下测定吸光度，以溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。3.未知蛋白质溶液的测定：准确移取血清样本0.1ml，置于10ml比色管中，定容至刻度。以生理盐水作参比，在λmax波长下测定吸光度。【实验结果】Cx=C×稀释倍数其中Cx为待测蛋白质溶液的质量浓度；C为由标准曲线确定的被测溶液蛋白质的质量浓度【注意事项】

7、1.由于蛋白质的紫外吸收峰常因溶液pH的改变而改变，测定时未知溶液与标准溶液的pH要一致。2.紫外分光光度法测定蛋白质的准确度较差，其主要原因为不同蛋白质中酪氨酸和色氨酸的含量不同，使得不同蛋白质溶液在280nm的吸光系数也不同。样品中若含有核酸，可分别测定在280nm和260nm的吸光度值，用经验校正公式计算蛋白质的浓度。蛋白质浓度=1.45×A280－0.74×A260(mg/mL)【仪器电脑操作】仪器连接自检→光谱扫描（设置200～400nm高速扫描）→方法设置（选择λmax，多点，固定波长，改单位）→进行测定（输入号码和浓度，记录吸光度值）收集于网络，如