抗CD20单链抗体融合显性抗原肽的原核表达和其抑瘤活性研究.pdf

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1、△4·5O1·doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2015．04．014·免疫学技术与方法·抗CD20单链抗体融合显性抗原肽的原核表达和其抑瘤活性研究①孙蕊朱琰冯海凉卞晓翠顾蓓王春景刘玉琴(中国医学科学院基础医学研究所／北京协和医学院基础学院病理学系和细胞资源中心，北京100005)中图分类号11392。11文献标志码A文章编号1000-484X(2015)04-0501-08[摘要]目的：人工设计并表达美罗华(C2B8)单链可变区抗体与李斯特菌溶细胞素O(Listeriolysin0，

2、LLO)显性抗原表位构成的重组融合蛋白(ScFv—pLLO)，初步分析其抗淋巴瘤细胞活性。方法：查询数据库获得美罗华(C2B8)单抗V和V基因序列，构建抗CD20单链抗体(ScFv)基因序列，选取LLO的2个CIMT细胞表位，构建单链抗体融合抗原表位的重组蛋白基因序列，克隆至原核表达载体，经诱导表达纯化，流式细胞术和免疫共沉淀分析其与淋巴瘤细胞结合能力，细胞增殖实验测定其对淋巴瘤细胞生长的影响，凋亡实验分析其诱导淋巴瘤细胞凋亡的能力，淋巴细胞增殖实验分析其免疫原性。结果：成功诱导表达重组蛋白ScFv—pLLO

3、。ScFv—pLLO可不同程度地靶向结合不同淋巴瘤细胞系，并明显抑制Raji细胞生长和诱导其凋亡。ScFv—pLLO可刺激免疫小鼠脾细胞增殖。结论：重组蛋白ScFv．pLLO保留了ScFv的功能，可靶向结合和抑制CD20阳性淋巴瘤细胞的生长，同时可激活机体免疫应答，为进一步研究其模拟瘤细胞表面抗原和作为瘤细胞疫苗佐剂的功能奠定基础。[关键词]CD20；单链抗体；B细胞淋巴瘤；抗原表位；李斯特菌溶细胞素0Expressionofarecombinantproteinbyfusinganti-CD20ScFvwi

4、thdominantantigenepitopesanditsanti-tumoractivitySUNRui，ZHUYah，FENGHal—Liang，BIANXiao-Cui，GUPei，WANGChun-ring，LIUYu—Qin．DepartmentofPathologyandCellResourceCenter，InstituteofBasicMedicalSciences，ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege，Be

5、ijing100005，China[Abstract]Objective：ToartificiallydesignandexpressarecombinantproteinnamedasScFv-pLLObyfusingSeFvgeneofRituximab(C2B8)anddominantantigenepitopesfromlisteriolysin0(LLO)，andstudyingitsanti—tumoractivity．Methods：VHandVLgenesequencesofC2B8again

6、stCD20wereacquiredbysearchingUnitedStatesPatentdatabase，andScFvsequencewasconstructedbylinkingVLandVHwithashonpeptidelinker．TwoCD4TcellepitopesfromLLOwereselectedanddesignedtospliceScFvsequence．TherecombinantgeneofScFv—pLLOwasclonedintoprokaryoticexpression

7、vectorandpurifiedafterinduction．ThecapacityofScFv—pLLOtarget—bindingtoB—celllymphomaswasevaluatedbyflowcytometry(FCM)andco—immunoprecipitation(Co—IP)．TheeffectsofScFv—pLLOonB—celllymphomasproliferationandapoptosisweredetectedrespectively．Theimmunogenicityof

8、ScFv·pLLOwasassessedbylymphocyteproliferationassay．Results：ScFv—pLLOwassuccessfullyexpressed．ItcouldbindtodifferentB—celllymphomascelllinesandobviouslyinhibitthegrowthofRajicellsaswellasinducingapoptos