诊断学实验课件：白细胞计数及白细胞分类.ppt

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1、1白细胞计数及白细胞分类2实验要求1.掌握白细胞计数及分类计数的操作方法，正常参考值及临床意义。2.学会血涂片的制备方法。3一、白细胞计数4原理将全血用稀酸溶液稀释一定倍数并破坏红细胞后充入血细胞计数池内，显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算求出每升血液内的白细胞数。56器材一次性消毒采血针一次性微量吸管试管、2ml吸管75％乙醇棉球、无菌干棉球7试剂白细胞稀释液：2％冰醋酸加亚甲蓝8操作步骤1、加稀释液取白细胞稀释液0.38ml于小试管中。2、采血用微量吸管吸取20μl加入白细胞稀释液中，用其上清清洗管

2、腔内残余液体2～3次。3、溶血混匀后室温静置，待液体变为棕褐色，即红细胞被完全破坏。4、充池混匀后冲入计数池，室温平放2～3min，待细胞下沉后显微镜计数。5、计数低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数。9101112结果计算=N×50×106式中：4个大格内的白细胞总数÷4算出每个大方格（即0.1μl）内白细胞平均数。×10换算为1μl。×20为血液稀释倍数。×106将1μl换算为1L。13注意事项1．每个大方格内计得的白细胞数相差超过10个，表示悬液未摇匀结果不可靠。2．其他注意事项和计数不准确的常见原因

3、与红细胞计数相似。14参考值成人4～10×109/L新生儿15～20×109/L15二、白细胞分类16（一）试剂和器材瑞氏（wright）染液pH6.4的磷酸盐缓冲液干净无油的载玻片边缘光滑干净的推片显微镜、香柏油、擦镜纸。17（二）方法1．常规消毒皮肤、采血。2．在载玻片的右端沾取一滴血，沾取时勿使玻片触及皮肤，把推玻片的一端放在血滴右侧，将推片略向左移触及血滴，血液即均匀附着于二片之间。3．使推片与载玻片中间形成30度夹角，平衡地向前推进，制成血涂片后，放在空气中待其自干，切勿加热干燥。4．置血片于水平支

4、架上，加瑞氏染液，直至血片被盖满为止，计算染液滴数。18（二）方法5．一分钟后，滴加等量缓冲液，同时轻轻振动血涂片，或用口吹气，使之与染液混匀。6．再染5-10分钟后，用水缓慢将染液冲去，冲洗前切勿将染液倾倒。7．空气中自然干燥（或用吸水纸吸干）后镜检，先用低倍镜观察血涂片染色是否良好厚薄是否适宜，选择涂片的中部及细胞分布均匀处，用油镜按一定顺序计数。19血涂片制作：推片载玻片血液将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度：快、大(厚)。慢、小（薄）一张满意的血涂片应厚薄均匀头体尾鲜明涂片干燥后用铅笔

5、在血涂片的头部写上姓名和编号李四B12320血涂片染色：勿冲洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后将Ⅰ液和Ⅱ液充分混允静置10分钟直接流水冲洗3-5分钟（切勿先到掉染液）涂片经水洗干燥后用油镜分类计数100个白细胞李四123涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴覆盖整个血膜1分钟21血涂片的观察：经染色后的血涂片先用低倍镜观察：1.染色情况(满意、偏酸、偏碱）2.观察细胞分布情况，选择细胞分布均匀之处转油镜进行白细胞分类计数。油镜分类时应按一定走向，不要重复计数李四1232223（三）注意事项1．血涂片的厚薄与下列因素有关：

6、血滴大则厚，小则薄；推片与载玻片之间的角度大则厚，小则薄；推抹涂片之速度快则厚、慢则薄。24（三）注意事项2．推片时用力要平衡，否则血膜出现厚薄不匀现象。良好的血片应分布均匀，位于玻片之中央，玻片两侧及上下边缘留空隙，血片一端较薄，适于细胞形态观察；另一端较厚，适用于寄生虫的寻找和白细胞减少时的分类计数。25（三）注意事项3．染色时应防止染色液干而出现沉淀物，冲洗时不能先倾倒染液应缓缓加水，使沉渣浮起溢去。染色时间的长短与温度有关，天热时间短些，天冷时间长些，也可在显微镜下染色，白细胞的细胞核和细胞浆内之颗粒

7、清楚显现时，即可冲洗。稀释液过酸时，红细胞和嗜酸性颗粒染成鲜红色，白细胞核往往不易着色，或色甚浅；稀释液过碱时，白细胞核色泽甚深，红细胞呈紫红色，嗜酸性颗粒呈暗红色。26（三）注意事项4．分类计数时如见到异常或未成熟白细胞，也应按不同种类分别计数，求出其百分数，应注意中性分叶核粒细胞内有无中毒颗粒和空泡。如见到空泡、有核红细胞，也要同时记下，但不列入白细胞分类计数的百分率内。27NEBLM白细胞分类28细胞名称(简称)直径细胞核细胞浆比值百分数(％)中性粒细胞(N)嗜酸性粒细胞(E)嗜碱性粒细胞(B)淋巴细胞

8、(L)单核细胞（M）10一1511一1610一l26一1510一20淡紫红色，核分2－5叶，或呈杵状。深紫红色，二叶核，呈眼镜样。核结构不清，分叶不明显。深紫红色，圆或椭圆，染色质致密成团块样。深紫红色，肾形、马蹄形或不规则形，有扭曲拆叠感，染色质呈粗网状。淡红色浆，均匀布满浅紫红色细小颗粒。淡红色浆，布满粗大，圆形而均匀一致红的桔红色颗粒。淡红色浆中有大小不等、分布不匀的蓝黑色颗粒，并常覆盖核上。