甲基对硫磷降解菌

《甲基对硫磷降解菌》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、甲基对硫磷降解菌的分离鉴定及水解酶基因克隆表达摘要4-5Abstract51.引言9-18    1.1农药与环境污染9    1.2有机磷农药的使用现状及中毒机理9-10    1.3微生物降解有机磷农药的研究进展10-17        1.3.1降解有机磷农药的微生物种类及筛选10-12        1.3.2微生物降解有机磷农药的降解机理与代谢途径12-13        1.3.3影响农药降解的因素13-14        1.3.4有机磷农药降解酶基因的克隆14-15        1.3.5降解酶的特性研究及工程菌的构建15-17    1.4本文研究的目的和意义1

2、7-182.实验材料与方法18-28    2.1实验材料18-20        2.1.1菌株和质粒18        2.1.2药品和试剂18        2.1.3主要仪器和设备18-19        2.1.4培养基与试剂配制19        2.1.5常用缓冲液19-20    2.2实验方法20-28        2.2.1菌株的富集培养及分离纯化20        2.2.2形态观察和生理生化鉴定20        2.2.3基因组DNA的提取20-21        2.2.4细菌16SrDNA的PCR扩增21        2.2.5菌株HS-D36对甲

3、基对硫磷的降解特性研究21-23        2.2.6菌株HS-D36反硝化能力的测定23-24        2.2.7DNA片段的连接转化24        2.2.8细菌质粒的提取24        2.2.9DNA限制性内切酶消化24-25        2.2.10DNA片段的回收25        2.2.11甲基对硫磷水解酶基因(mpd)的克隆25        2.2.12原核细胞中重组质粒的筛选25-26        2.2.13MPD蛋白的原核表达及表达产物的SDS-PAGE分析26        2.2.14重组甲基对硫磷水解酶MPD的初步研究26-28

4、3.实验结果28-43    3.1甲基对硫磷菌株的分离和鉴定28    3.2形态观察及生理生化鉴定28-30        3.2.1降解菌形态观察28-29        3.2.2降解菌的生理生化鉴定29-30        3.2.3菌株的生长曲线的测定30    3.3降解菌16SrDNA的鉴定30-32        3.3.1降解菌基因组DNA的提取30-31        3.3.2降解菌的16SrDNA的测序31-32        3.3.3降解菌的系统进化分析32    3.4菌株降解性能分析32-37        3.4.1菌株HS-D36降解性能分析3

5、2-36        3.4.2菌株HS-D36反硝化能力的研究36-37    3.5甲基对硫磷水解酶基因mpd克隆表达37-41        3.5.1PCR扩增甲基对硫磷水解酶基因mpd37        3.5.2重组质粒pMD-mpd的构建及鉴定37-39        3.5.3重组表达质粒pET-mpd的构建及鉴定39-40        3.5.4mpd基因在大肠杆菌BL21中的表达与鉴定40-41    3.6粗酶液活性的初步分析41-43        3.6.1对硝基苯酚标准曲线和蛋白质标准曲线的制作41        3.6.2酶反应的最适温度、pH41

6、-42        3.6.3金属离子对重组酶粗酶液的影响42-434讨论43-45    4.1野生型菌株与重组工程菌43    4.2降解途径的分析43-44    4.3降解基因的克隆表达44    4.4后续工作设想44-455结论45-46附录46-47参考文献47-55硕士期间发表的论文55-56致谢56