一株对硫磷降解菌的诱变复壮研究

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1、第8卷第6期安全与环境学报Vo1．8No．62008年12月JournalofSafetyandEnvironmentDec，2008文章编号：1009—6O94(2008)06—0009—05的降解能力高于初始菌株10％。可见，通过微生物来消减农药污染的生物修复技术有广阔的应用前景。一株对硫磷降解菌的对硫磷(Parathion，简称Prr)化学名称为O，0一二乙基一0一(对硝基苯基)硫代磷酸酯，俗称1605或乙基一1605，结构诱变复壮研究式见图1。对硫磷属于内渗型有机磷类杀虫剂，自1944年合姜彬慧，史艳芳，李志明，成以来被广泛使用，对土

2、壤和土壤生物造成了严重危害_1。李登勇，金雁。，姜莉。研究发现，芽孢杆菌属、黄单胞菌属、固氮菌属、短杆菌属、假(1东北大学资源与土木工程学院，沈阳110004；单胞菌属、黄杆菌属、木霉属和青霉属的一些微生物能够降解2沈阳出入境检验检疫局，沈阳110016)对硫磷。为筛选出高效降解P，r农药的菌株、建立高效降解微生物摘要：从长期施用对硫磷的土壤中筛选分离出1株能以对硫磷为种子库，同时为微生物修复污染土壤提供新菌源，本研究自长唯一C源的菌株D10，研究微生物对有机磷农药的降解作用。鉴定表期施用PI1的土壤中分离筛选出菌株D10。为提高其降解率，明

3、，D10为不动杆菌属(Acinetobactersp．)微生物，该菌株对农药对硫磷对D10进行诱变、复壮，以期为D10在农药污染土壤微生物修的最大耐受质量浓度为1800mg／L，但D10对农药对硫磷的降解率仅复中的应用奠定基础。为25％。本文通过DIO诱变复壮试验提高对硫磷降解率，结果表明，经紫外线(18w)辐照1Os后，D10对农药对硫磷降解率提高至1材料与方法49．1％；用0．8％盐酸羟胺溶液振荡处理30min后，降解率为69．6％；1．1试验材料用60％土壤浸出液振荡培养48h后，降解率为53．9％。对D10进行1)菌株。上述条件下的复

4、合诱变，对硫磷降解率可达到82．8％。高效降解菌的从河北省石家庄栾城县某村长期受有机磷农药污染的农选育为提高微生物对农药的降解奠定了基础。此外，通过改进有机磷田土壤中筛选出7株长势较好的野生菌株，选择性状较稳定农药萃取的前处理方法，使紫外分光光度法检测简便、精确，与气相色的D10进行驯化及Pr降解试验。经中科院微生物研究所鉴谱法检测结果拟合较好，具有一定实用价值。关键词：环境生物学；对硫磷降解菌；诱变；复壮；对硫磷；定，D10为不动杆菌属(Acinetobactersp．)微生物。该菌株驯化生物降解。后对frr农药的最大可耐受质量浓度为180

5、0mg／L。中图分类号：X172文献标识码：A2)试剂与培养基。试剂包括盐酸羟胺(丹东化工工厂一分厂)；PT标准品0引言(100mg／L，农业部环境保护科研监测所研制)；PT乳油质量农药的使用虽然保证了农作物的稳产、高产，但其低效率分数为50％(天津红星制药厂)。和不合理的使用也使农产品中的农药残留严重超标，对环境牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏5．0g，蛋白胨10．0g，氯化乃至人体造成的危害也越来越严重_lJ。据环保部门监测，黄钠5．0g，蒸馏水1000mL，pH=7．2～7．4。河三角洲地区连续栽培5年以上的果园和蔬菜保护地的土壤无机盐培养基

6、：磷酸氢二钠1．0g，磷酸二氢钾0．5g，硫中有机磷农药的检出率高达80％以上l2J。因此，对有机磷农酸镁0．5g，氯化氨0．5g，蒸馏水1000mL，pH=7．0—7．2。药污染的治理迫在眉睫l3．4j。目前，有关农药污染治理的研3)仪器。究多为生物修复(主要指微生物修复)，这也是公认的对环境SW—CJ一2FD无菌洁净工作台(苏州安泰空气技术有限友好、不容易产生二次污染的方法l5，6J。自20世纪70年代人公司)，HP6890气相色谱分析仪(美国惠普公司)，DZKW一4恒们发现某些土壤微生物对有机磷农药具有降解作用以来，已温水浴锅，LDZ4

7、—0．8低速自动平衡离心机(北京医用离心机发现的有机磷农药降解微生物包括细菌、真菌、放线菌和藻厂)，SHZ一82A恒温振荡器(江苏国华仪器有限公司)，MLS一类。目前，已分离出多种有机磷农药降解菌，其中一些微生物3750高压蒸汽灭菌器(13本三洋)，LRH一250一A生化培养箱有机磷降解酶的生化性质已得到鉴定，少数有机磷农药降解(广东省医疗器械厂)，752型紫外可见分光光度计(上海实博基因也得到分离、鉴定和改造J。细菌具有多种生理生化适实业有限公司)，PL203电子天平(德国)。应能力且容易产生突变菌株，通过物理和化学诱变可提高菌1．2试验方

8、法株对农药的降解作用，因此细菌在降解农药的微生物中占有1．2．1原始菌株D10降解P，r试验重要地位_8。刘智等l】J采用紫外线和氯化锂复合诱变，从将驯化后的原始菌