热休克蛋白60对小鼠树突状细胞功能影响的论文

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1、热休克蛋白60对小鼠树突状细胞功能影响的论文【摘要】目的：探讨动脉粥样硬化中重要炎性物质——热休克蛋白60(hsp60)体外对小鼠树突状细胞(mdc)功能影响。方法：小鼠骨髓提取dc，体外培养成熟后与两种浓度mhsp60孵育，动态观察dc突起改变；流式细胞仪检测孵育前后mdc表面标志改变；mlr测定孵育前后mdc刺激功能变化；elisa法测定mlr上清液中细胞因子浓度。结果：孵育后，mdc突起增加明显；cd11c+、cd80及cd86表型显著增加；淋巴细胞刺激功能明显增强；分泌细胞因子il12、ifnγ增

2、加（p<0.01）而il4增加不明显(p>0.05)，ifnγ/il4比值升高。结论：mhsp60体外可以促进mdc功能，作用呈剂量依赖性。【关键词】热休克蛋白60树突状细胞动脉粥样硬化表型细胞因子　　effectofheatshockprotein60onmurinedendriticcellfunctioninvitro　　entofcardiology,unionhospital,tongjimedicalcollege,huazhonguniversityofscienceandte

3、chnology,matoryfactorinatherosclerosis,onthematurationofmurinedendriticcells(mdcs)invitro.methods:myeloidmdcsmousemarroaturehsp60.themorphologicalchangesetricanalysis;thestimulatingcapacityinedinallogenicmixedlymphocytereaction(mlr);elisadcsandstimulatedlym

4、phocyteinthemediumofmlr.results:dendritesofmhsp60dcsraisedobviously.theexpressionofcostimulatingfactorcd11c+,cd86,cd80ulatingcapacityofmhspdcsinmlrphocytescoculturedhspdcsinmlrsecretedhigherlevelsofproinflammationcytokines(ifnγ,il12)butthereulatorya

5、ctionhsp60progressedthematurationofmdcdosedependentlyinvitro.　　［keygmcsf和rmil4购自biosource公司；fitcantimousecd11c+、peantimousecd80及peantimousecd86购自biolegend公司；mhsp60购自stressgen公司；il4、ifnγ、il12elisa试剂盒购自rd公司。完全培养基包括：rpmi1640(gibco公司)，20%胎牛血清(gibco公司)，

6、青霉素100u/ml，链霉素100u/ml，20ng/mlrmgmcsf，20ng/mlrmil4。　　1.2方法　　1.2.1小鼠骨髓dc培养参照文献［4］方法稍做改进。简言之，取小鼠股骨和胫骨，去掉骨两端，用5ml注射器吸取rpmi1640液冲洗髓腔，收集所得液体，200目尼龙网过滤后，trisnh4cl溶解红细胞，细胞悬于20%胎牛血清rpmi1640培养液中，种植于50ml培养瓶中，置于37℃、5%co2孵育箱中，过夜后，弃去悬浮细胞，再加3ml新鲜完全培养基，37℃、5%co2温箱培养，隔天半

7、量换液，每次换液均保留细胞悬液直至第9天。　　1.2.2实验分组及细胞处理将培养第9天的细胞分为3组：①对照组：培养液加pbs；②高剂量组：培养液加mhsp6010μg/ml；③低剂量组：培养液加mhsp603μg/ml。3组均孵育24小时后保留细胞悬液。　　1.2.3形态观察培养3、5、9和10天，用倒置显微镜，电镜和fitcanticd11c+荧光染色后在荧光显微镜下观察dc形态。　　1.2.4流式细胞仪检测（fasc）收集细胞调整密度为1×106ml-1，每管为100μl，加入标记抗体fitccd1

8、1c+、pecd80及pecd86，各0.1μg，4℃孵育20分钟，pbs洗2遍，加入0.5mlpbs重悬，美国bectondickinson公司流式细胞仪双标检测mdc的表型，以cd11c+设门，cellquest软件分析。　　1.2.5同种混合淋巴反应（mlr）取近交系balb/c小鼠脾脏匀浆过滤后，去除红细胞培养2～3小时后取悬浮细胞，即淋巴细胞作为反应细胞。调整淋巴细胞为105/孔，md