叠鞘石斛茎段组织培养与花芽诱导论文

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1、叠鞘石斛茎段组织培养与花芽诱导论文【摘要】目的研究叠鞘石斛的快速繁殖及离体开花的培养体系。方法选用野生的叠鞘石斛带侧芽的茎段作为外植体，培养在附加不同激素的培养基上。结果MS培养基附加6-BA（1.0mg·L-1），NAA（0.5mg·L-1）对侧芽的诱导效果最佳。而MS培养基附加6-BA（2.0mg·L-1），NAA（0.4mg·L-1）最适合丛生芽的增殖。把无菌苗培养在附加6-BA（2.0mg·L-1）的MS培养基中，少数植株被诱导开花，诱导率为10.0%。结论用带腋芽的茎段作为外植体在MS培养基中，附加一定的6-BA和NAA可以诱导丛生芽的产生。【关

2、键词】叠鞘石斛；组织培养；花芽诱导Abstract：ObjectiveTostudyrapidpropagationandinvitrofloforDendrobiumdenndanum.MethodsStemediaone.ResultsThebestmediumforlateralbudsinductiong·L-1),NAA(0.5mg/L),g·L-1),NAA(0.4mg·L-1)ediumg·L-1),thefrequencyoffloralbudinductionthesegmentsediumdenndanum;Tissueculture;

3、Inductionoffloralbuds石斛是常用名贵中药材，属兰科（Orchidaceae）石斛属Ddendrobium。现已发现.freeldenndanum采于贵州省紫云县，并经贵州大学生命科学学院植物学教研室鉴定为叠鞘石斛。标本种植于贵州大学植物标本地。1.2材料处理与接种选取生长健壮、无病虫害感染的茎段，将其截成长1～1.5cm的带芽茎段，用流水冲洗1h，在超净工作台用75%的酒精消毒30s，再用0.1%的HgCl溶液消毒12min，无菌水冲洗5次。将此茎段接种于芽启动培养基上。每个配方接种10瓶，每瓶接种5段，22～24℃，光照12h/d，光

4、强度2000lx条件下培养。1.3培养基1.3.1芽启动培养基①MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；②MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA1.0mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；③1/2MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；④1/2MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA1.0mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂。1.3.2芽增殖培养基①MS+NAA0.4mg·L-1+不同浓度6－BA（单位同前）+2%蔗糖+0.8%琼脂；②MS+NAA0.4mg·L-1+

5、不同浓度KT（单位同前）+2%蔗糖+0.8%琼脂；③MS+NAA0.4mg·L-1+不同浓度ZT（单位同前）+2%蔗糖+0.8%琼脂。1.3.3生根培养基①MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.4mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；②MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.4mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；③MS+6-IBA1.5mg·L-1+NAA0.4mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂。1.3.4成花诱导培养基①MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；②MS+ABA0.5mg·L-1+2%

6、蔗糖+0.8%琼脂；③MS+2－4D0.1mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；④MS+6-BA2.0mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；上述培养基pH均为5.8。2结果2.1启动培养外植体培养30d后，茎节部的侧芽开始萌动，与培养基接触的部位逐渐形成乳白色的瘤状突起，以后突起逐渐膨大，颜色由白转绿（见图1），大约40d以后芽开始伸长，60d后形成丛生状小苗。几种诱导启动培养基均能诱导芽的萌发(见图2)，其中以培养基①和③中产生的芽多。培养基①和③所含的激素浓度相同而基本培养基不同，分别是MS培养基和1/2MS培养基，说明基本

7、培养基对叠鞘石斛芽的萌发影响不大，6-BA和NAA的浓度对芽的萌动和发育有一定影响，当6-BA在1.0mg·L-1，NAA在0.5mg·L-1时对芽的萌发生长最有利。此外，选择靠近茎尖的茎节端，通常容易诱导芽的萌发，这可能与茎尖主要由具有胚性的分生细胞构成，其分裂能力高于茎段的其它部位。2.2丛生芽的增殖培养把无菌苗从茎上切下转接到增殖培养基中培养。大约10d左右，在原来萌发的芽周围开始产生不定芽,进而形成丛生芽，连续转接2～3次，可以不断增加丛生芽的数量。常用的细胞分裂素有KT，ZT，6-BA，将这3种激素及不同浓度配比的增殖培养基对芽的增殖进行比较（见

8、表1）。结果表明，6-BA的对丛生芽的增殖效果最明显，平均芽增殖倍