叠鞘石斛茎段组织培养与花芽诱导

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1、叠鞘石斛茎段组织培养与花芽诱导【摘要】　　目的研究叠鞘石斛的快速繁殖及离体开花的培养体系。方法选用野生的叠鞘石斛带侧芽的茎段作为外植体，培养在附加不同激素的培养基上。结果MS培养基附加6-BA（1.0mg·L-1），NAA（0.5mg·L-1）对侧芽的诱导效果最佳。而MS培养基附加6-BA（2.0mg·L-1），NAA（0.4mg·L-1）最适合丛生芽的增殖。把无菌苗培养在附加6-BA（2.0mg·L-1）的MS培养基中，少数植株被诱导开花，诱导率为10.0%。结论用带腋芽的茎段作为外植体在MS培养基中，附加一定的6-

2、BA和NAA可以诱导丛生芽的产生。【关键词】叠鞘石斛；组织培养；花芽诱导　　Abstract：ObjectiveTostudyrapidpropagationandinvitrofloforDendrobiumdenndanum.MethodsStemediaone.ResultsThebestmediumforlateralbudsinductiong·L-1),NAA(0.5mg/L),g·L-1),NAA(0.4mg·L-1)ediumg·L-1),thefrequencyoffloralbudinduction

3、thesegmentsediumdenndanum;Tissueculture;Inductionoffloralbuds　　石斛是常用名贵中药材，属兰科（Orchidaceae）石斛属Ddendrobium。现已发现，该属有很多种类具有药用价值，其中铁皮石斛、金钗石斛、霍山石斛等药用价值很高，价格昂贵。石斛中含有多种生物碱、抗癌菲、类黄酮等物质，具有抗衰老、增强机体免疫力等作用〔1〕，其应用范围较广，需求量不断增加。但近年来由于受过度采伐、生长缓慢、繁殖率低等因素的影响，使石斛的野生资源严重枯竭，我国已将其列为濒危药

4、用植物〔2〕，为挽救石斛属的植物物种，扩大药源，前人已对多种石斛属的植物进行了组织培养快速繁殖的研究〔3～6〕，但对叠鞘石斛的组织培养目前尚未见报道。本文报道了叠鞘石斛茎段在不同激素配比培养基中出芽、发育成苗的过程，同时初步进行了离体开花的诱导。　　1材料与方法　　1.1材料供试材料叠鞘石斛Dendrobiumdenndanum采于贵州省紫云县，并经贵州大学生命科学学院植物学教研室鉴定为叠鞘石斛。标本种植于贵州大学植物标本地。　　1.2材料处理与接种选取生长健壮、无病虫害感染的茎段，将其截成长1～1.5cm的带芽茎段，

5、用流水冲洗1h，在超净工作台用75%的酒精消毒30s，再用0.1%的HgCl溶液消毒12min，无菌水冲洗5次。将此茎段接种于芽启动培养基上。每个配方接种10瓶，每瓶接种5段，22～24℃，光照12h/d，光强度2000lx条件下培养。　　1.3培养基　　1.3.1芽启动培养基①MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；②MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA1.0mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；③1/2MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1+2%蔗

6、糖+0.8%琼脂；④1/2MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA1.0mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂。　　1.3.2芽增殖培养基①MS+NAA0.4mg·L-1+不同浓度6－BA（单位同前）+2%蔗糖+0.8%琼脂；②MS+NAA0.4mg·L-1+不同浓度KT（单位同前）+2%蔗糖+0.8%琼脂；③MS+NAA0.4mg·L-1+不同浓度ZT（单位同前）+2%蔗糖+0.8%琼脂。　　1.3.3生根培养基①MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.4mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；②MS+6-BA1.0

7、mg·L-1+NAA0.4mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；③MS+6-IBA1.5mg·L-1+NAA0.4mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂。　　1.3.4成花诱导培养基①MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；②MS+ABA0.5mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；③MS+2－4D0.1mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；④MS+6-BA2.0mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；上述培养基pH均为5.8。　　2结果　　2.1启动培

8、养外植体培养30d后，茎节部的侧芽开始萌动，与培养基接触的部位逐渐形成乳白色的瘤状突起，以后突起逐渐膨大，颜色由白转绿（见图1），大约40d以后芽开始伸长，60d后形成丛生状小苗。几种诱导启动培养基均能诱导芽的萌发(见图2)，其中以培养基①和③中产生的芽多。培养基①和③所含的激素浓度相同而基本培养基不同，分别是MS培养基和1/2M