黄芪多糖对糖尿病大鼠肾组织胰岛素受体及其底物1的影响论文

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1、黄芪多糖对糖尿病大鼠肾组织胰岛素受体及其底物1的影响论文【摘要】目的研究黄芪多糖（APS）对糖尿病大鼠肾组织胰岛素受体（IR）及胰岛素受体底物1（IRS1）表达的影响及其治疗糖尿病的作用机制。方法用APS治疗高脂饮食喂养加小剂量链脲佐菌素（STZ）腹腔注射诱导糖尿病（DM）大鼠，检测血糖，IR及IRS1的变化，观察APS对糖尿病大鼠的作用。结果DM大鼠血糖含量明显升高（P0.01），IR及IRS-1表达明显降低（P0.01）；APS能明显增加DM大鼠IR及IRS-1的表达（P0.01），降低血糖水平（P0.01）。结论APS可降低糖尿病大鼠血糖水平，其机制可能与提高糖尿病大鼠肾

2、组织中IR，IRS1的表达.freela公司。APS溶液：APS从山西产黄芪根中提取制成粉剂，临用前用生理盐水新鲜配制成20g/L的溶液。鼠IRS－1单克隆抗体，美国Neomarkers公司。兔InsR多克隆抗体，武汉博士德生物工程有限公司。SP试剂盒，北京中山生物技术公司。OnetouchⅡ血糖测定仪及试纸，美国JansonandJanson公司。切片机，国产LKB11800。显微镜，日本OlympasCH30。HPIAS1000型全自动图像分析系统。1.2方法1.2.1糖尿病模型的建立与分组实验动物分为4组。正常对照组：给予普通饲料（60%碳水化合物，22%蛋白质，10%

3、豆油脂肪，包括纤维素在内的其他成分8%）喂养，用等体积生理盐水灌胃处理5周。APS对照组：普通饲料，APS溶液［400mg/（kg·d）］灌胃处理5周。DM组：给予高脂饲料（41%脂肪，41%碳水化合物和18%蛋白质），尾静脉注射链脲佐菌素（STZ）（30mg/kgSTZ，溶于0.1mol/L柠檬酸缓冲盐溶液，pH4.5），注射后动物自由进食，进水并维持高脂饮食，STZ注射72h后，测动物空腹血糖，大于6.7mmol/L者可诊断为糖尿病［3］。DM+APS组：空腹血糖大于6.7mmol/L的动物继续喂以高脂饲料，同时APS溶液［400mg/（kg·d）］灌胃处理5周。1.2.2各项指

4、标检测所有大鼠观察毛发、活动等情况，并取尾静脉血测空腹血糖。1.2.3IR与IRS-1蛋白的检测处死动物后，取肾组织，4%多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，切片（4μm）；3%H2O2室温孵育10min；5%～10%正常山羊血清封闭10min；加入一抗，37℃孵育1～2h；滴加生物素标记的二抗，37℃10min；滴加辣根过氧化物酶标记的链卵白素，37℃10min；DAB显色，室温3min；苏木素复染1min；酒精脱水；中性树胶封片。免疫组化图像分析应用高清晰彩色病理图像免疫组化测量系统（HPIAS1000），经标准灰度校正后，随机取5个视野，分别测定IR，IRS-1的平均光密度值（IDP

5、）。1.2.4统计学处理采用SPSS11.5统计软件进行，实验数据以均数±标准差(±s)表示,组间比较用t检验。P0.01有显著性差异。2结果2.1实验动物一般情况DM大鼠毛发干枯、杂乱、脱落、蜷卧、活动减少。给APS治疗后，大鼠精神好转、毛发光整、有色泽、活动增多。2.2血糖如表所示，DM组和DM+APS组血糖水平均高于对照组，差别有显著性（P0.01），DM+APS组血糖水平低于DM组，差别有显著性（P0.01）。2.3IR和IRS-1的表达免疫组化图像分析IR和IRS-1的平均光密度值（IDP）见表，DM组肾组织IR，IRS-1表达水平均低于对照组，差别有显著性（P0.01）；

6、DM+APS组IR、IRS-1表达水平均高于DM组，差别有显著性（P0.01）；APS不影响正常对照大鼠肾的IR和IRS-1的表达。3讨论胰岛素经血液循环到达相应靶组织后，与其上的胰岛素受体α亚单位相结合，激活其β亚单位的内在激酶活性，导致IR自磷酸化。磷酸化的IR一方面为其它信号分子提供结合位点，另一方面其磷酸激酶可致IRS－1磷酸化。IRS－1被磷酸化后即暴露出特异性结合位点，能募集并激活含有SH2区域的蛋白质激酶磷脂酰肌醇3激酶（PI3K），使信号以激酶链式反应下传。IRS－1通过激活PI3K激酶导致磷酸肌醇依赖的蛋白激酶（PDK1）的激活，后者可使蛋白激酶B（PKB）磷酸化，

7、活化的PDK1或磷酸化的PKB可导致葡萄糖转移因子4（GLUT4）的合成、分泌、移位等变化［4，5］。GLUT4是直接影响葡萄糖入胞的细胞因子，对血糖的调节极其重要。现有资料表明，血糖的调节主要受IR/IRS－1/PI3K/PDK1/PKB/GLUT4信号途径的影响，所以当其信号径路中IR和IRS发生障碍或异常时可导致糖尿病［4，5］。本实验结果表明：DM组血糖水平明显高于对照组，提示本实验所用动物模型符合糖尿病的特征。DM+APS组血糖水平明显低于DM组