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《2002—2005年华东地区家鸭中不同ha亚型低致病性禽流感病毒的分布》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、2002—2005年华东地区家鸭中不同HA亚型低致病性禽流感病毒的分布888中国人兽共患病ChineseJournalofZoonoses2006,22(9)文章编号:1002—2694(2006)09—0888—022002—2005年华东地区家鸭中不同HA亚型低致病性禽流感病毒的分布薛峰,彭宜,钱忠明,张评浒,刘秀梵中图分类号:$852.65文献标识码:B从2002年起我们对中国华东地区部分省市的家鸭进行LPAIVs的病毒学监测,主要对家鸭中AIVs的感染率,亚型分布,分布的时间规律等方面进行研究.其目的就是为我国制定禽流感防制措施提供详实的流行病学信息.并对水禽中流感病毒
2、的自然基因库进行研究.探讨陆地家禽中流行的AIVs与水禽中流行的AIVs之间的关系.1材料和方法1.1病毒禽流感琼扩抗原和阳性血清禽流感琼扩抗原和抗H1一H15阳性血清由中国农科院哈尔滨兽医研究所研制,江苏省畜牧兽医总站馈赠.1.2运输液运输液的配制是根据OIE推荐的配方.1.3样品采集2002年7—8月,分别在华东地区选择曾经发生过LPAIV的地区的健康鸭群采集泄殖腔拭子.所有采样的鸭群都饲养在河水边,共有9群鸭,共采集了673个鸭泄殖腔拭子,每群采集的样品数见表l.2002年l2月至2005年1O月,从LBM共采集3227个鸭泄殖腔拭子.每月采集的样品数见表l.1.4样品处
3、理与病毒分离处理样品时.用力搅动棉拭子,以3000r/min速度离心10min,取上清后置一7O℃冰箱冻存,按文献方法尿囊腔接种10日龄非免疫鸡胚,接种剂量为0.2ml/胚,每个样品接种4枚鸡胚.收获鸡胚尿囊液并检测血凝价,将有血凝价的样品置一2O℃冻存待鉴定.1.5病毒鉴定1.5.1血凝抑制试验(HI)将有血凝价的样品分别与抗NDV和抗EDS-76特异性血清做HI试验,按文献方法进行,从有血凝价的样品排除新城疫病毒,类EDS-76的腺病毒.1.5.2琼脂扩散试验(AGP)经HI试验检测后,对既不是H5亚型AIVs.也不是NDV和EDS一76病毒但有血凝价的样品,按文献方法进行
4、琼扩试验.即从上述这些样品的鸡胚中取出绒毛尿囊膜.用绒毛尿囊膜制备的这些琼扩抗原与禽流感琼扩阳性血清做AGP试验.同时设禽流感阳性琼扩抗原和阳性血清的对照.1.5.3AIVsHA亚型鉴定经AGP试验和HI试验鉴定为AIVs.部分样品送中国农科院哈尔滨兽医研究所做禽流感病毒HA亚型的鉴定.对用HI试验仍不能确定HA亚型的分离株采用HA亚型特异引物的RT-PCR方法鉴定HA亚型.按文献方法进行.即对Hl—Hl5亚型的l5个HA基因的保守序列设计l5对引物,用RT—PCR法HA基因部分片段并测序来鉴定HA亚型.2结果2.1家鸭中有血凝活性的病毒2002年7—8月及2002年l2月至2
5、005年lO月,共采集3900个鸭泄殖腔拭子,用鸡胚尿囊腔传代接种法进行病毒分离.从这些棉拭子样品中共分离到716株AIVs(已经过纯化鉴定的.不含未纯化好的病毒),总分离率为l8.4(716/3900),见表l.另外还分离到73株新城疫病毒(数据未显示).没有分离到类减蛋综合征病毒的腺病毒.表1不同月份家鸭中AIVs的分离率*农业部资助项目(农牧办[2001383)通讯作者:刘秀梵Email:xfliu@yzu.edu.cn作者单位:扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室,扬州2250092006.22(9)中国人兽共患病ChineseJournalofZoonoses88
6、92.2不同月份AlVs的分离率从表1中可以看出前后共37个月份的AIVS分离率.2003年1月,2004年11月和2003年3月AIVS的分离率分别为56.4,43.0和40.5%.明显高于其它月份的分离率.其次是2003年2月,2004年12月和2005年6月,1月,1O月.它们的AIVS分离率在3O～4O.分离率最低的月份为2004年6月,7月以及2003年6月,7月,8月和9月.这阶段每个月份的AIVS分离率都低于6.从季节上来看,冬春两季时家鸭中AIVS分离率较高.2002年12月一2005年5月共从1948个样品中分离到505株AIVS.平均分离率为25.9.占AI
7、Vs总数的70.5(505/716);而夏季的分离率最低.从2OO2—2005年四个夏季采集的1398个样品分离到119株AIVs病毒.平均分离率仅为8.5,占AlVs总数的16.6(119/716).表2.表2家鸭中不同季节Airs分离率2.3家鸭中不同HA亚型LPAIVs的分布从家鸭中分离的716株AIVs经HI试验并结合RT—PCR方法进行HA亚型鉴定,共鉴定出8种HA亚型LPAIVs.包括H1,H3,H4,H6,H8,H9,H10和H11.其中H3亚型AIVs,分离率为2.6,占AI
