注射用重组人促红素(cho细胞)

《注射用重组人促红素(cho细胞)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、注射用重组人促红素（CHO细胞）ZhusheyongChongzuRenCuhongsu(CHOXibao)RecombinantHumanErythropoietinforInjection(CHOCell)本品系由高效表达人红细胞生成素（简称人促红素）基因的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，经细胞培养、分离和高度纯化后冻干制成。含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素。1基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。2制造2．1工程细胞2．1．1名称及来源重组人促红素工程细胞系由带有人促红素基因的重组质粒转

2、染的CHO-dhfr-(二氢叶酸还原酶基因缺陷型细胞)细胞系。2．1．2细胞库建立、传代及保存由原始细胞库的细胞传代，扩增后冻存于液氮中，作为主细胞库；从主细胞库的细胞传代，扩增后冻存于液氮中，作为工作细胞库。每次传代不超过批准的代次。细胞系冻存于液氮中，检定合格后方可用于生产。2．1．3主细胞库及工作细胞库细胞的检定应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。2．1．3．1外源因子检查细菌和真菌（附录XIIA）、支原体（附录XIIB）、病毒检查（附录XIIC）均应为阴性。2．1．3．2细胞鉴别试验应用同工酶分析、生物

3、化学、免疫学、细胞学和遗传标记物等任一方法进行鉴别，应为典型CHO细胞。2．1．3．3人促红素表达量应不低于原始细胞库细胞表达量。2.1.3.4目的基因核苷酸序列检查（工作种子批可免做）目的基因核苷酸序列应与批准序列相符。2．2原液2．2．1细胞的复苏与扩增从工作细胞库来源的细胞复苏后，于含灭能小牛血清培养液中进行传代、扩增，供转瓶或细胞培养罐接种用。小牛血清的质量应符合规定（附录ⅫID）。2．2．2细胞培养液生产用细胞培养液应不含牛血清和任何抗生素。2．2．3细胞培养细胞培养全过程应严格按照无菌操作。细胞培养时间可根据细胞生长情

4、况而定。2．2．4分离纯化收集的培养液采用经批准的超滤法或其他适宜方法进行浓缩，多步色谱纯化后制得高纯度的重组人促红素，即为人促红素原液。除菌过滤后保存于适宜温度，并规定其有效期。2．2．5原液检定按3.1项进行。2.3半成品2.3.1配制与除菌原液加入适宜稳定剂，并用缓冲液稀释。除菌过滤后即为半成品。2.3.2半成品检定按3.2项进行。2.4成品2.4.1分批应符合“生物制品分批规程”规定。2.4.2分装及冻干应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。半成品应及时分装、冷冻。冻干的全过程中，制品温度应不高于30℃。2.4.3规格应为

5、经批准的规格。2.4.4包装应符合“生物制品包装规程”规定。3检定3.1原液检定3.1.1蛋白质含量用4g/L碳酸氢铵溶液将供试品稀释至0.5-2mg/ml，作为供试品溶液。以4g/L碳酸氢铵溶液作为空白测定供试品溶液在320nm，325nm，330nm，340nm，345nm和350nm的吸光度。用读出的吸光度的对数与其对应波长的对数做直线回归，求得回归方程。照紫外-可见分光光度法（附录IIA），在波长276nm～280nm处，测定供试品溶液最大吸光度Amax，将Amax对应波长带入回归方程求得供试品溶液由于光散射产生的吸光度A

6、光散射。按下式计算，应不低于0.5mg/ml。蛋白质含量（g/100ml）=（Amax-A光散射）÷7.43×供试品稀释倍数3.1.2生物学活性3.1.2.1体内法依法测定（附录ⅩB）。3.1.2.2体外法按酶联免疫法试剂盒说明书测定。3.1.3体内比活性每1mg蛋白质应不低于1.0×105IU。体外比活性每1mg蛋白质应不低于9.0×104IU。3.1.4纯度3.1.4.1电泳法依法测定（附录ⅣC）。用非还原SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，考马斯亮蓝染色，分离胶胶浓度为12.5%，加样量应不低于10μg，经扫描仪扫描，纯度应不低于

7、98.0%。3.1.4.2高效液相色谱法依法测定（附录ⅢB）。亲水硅胶体积排阻色谱柱，排阻极限300kD，孔径24nm,粒度10μm，直径7.5mm,长30cm；流动相为3.2mmol/L磷酸氢二钠1.5mmol/L磷酸二氢钾400.4mmol/L氯化钠，pH7.3；上样量20～100μg，于波长280nm处检测，以人促红素色谱峰计算理论板数应不低于1500。按面积归一化法计算人促红素纯度，应不低于98.0%。3.1.5分子量依法测定（附录ⅣC）。用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，考马斯亮蓝R250染色，分离胶胶浓度为12.

8、5%，加样量应不低于1μg，分子质量应为36～45kD。3.1.6紫外光谱扫描依法测定（附录ⅡA），用水或生理氯化钠溶液将供试品稀释至0.5-2mg/ml,在光路1cm、波长230nm-360nm下进行扫描，最大吸收峰279nm±2nm；最小吸收峰