液相色谱_串联质谱法快速同时测定婴幼儿配方乳粉中氯霉素_三聚氰胺_甲硝唑和洛硝达

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1、液相色谱-串联质谱法快速同时测定婴幼儿配方乳粉中氯霉素、三聚氰胺、甲硝唑和洛硝达唑王浩*杨红梅郭启雷刘艳琴史海良田艳玲(国家食品质量安全监督检验中心，北京100094)摘要建立了婴幼儿配方乳粉中三聚氰胺、氯霉素、甲硝唑和洛硝达唑残留的高效液相色谱-串联四极杆质谱联用测定方法。样品经碱性乙腈提取，以MGⅢ-C18色谱柱(150mm2．1mm，5!m)分离，流动相为×60mmol/L乙酸铵溶液(含0．4‰甲酸)和甲醇，梯度洗脱，流速为0．25mL/min。采用多反应监测正离子或负离子模式，可以同时对婴幼儿配方乳粉中的三聚氰胺、氯霉素、甲硝唑和洛硝达唑进行快速定性和定量测定。在优化条件下

2、，4种化合物检出限为0．3～50．0!g/kg，方法回收率为61．4%～96．2%，相对标准偏差(RSD)为1．8%～9．8%。采用本方法测定了多种市售婴幼儿配方奶粉。本方法操作简单、测定结果准确，可用于婴幼儿配方奶粉中三聚氰胺、氯霉素、甲硝唑和洛硝达唑残留的同时快速测定。关键词液相色谱-串联质谱;氯霉素;三聚氰胺;甲硝唑;洛硝达唑;乳粉1引言婴幼儿配方乳粉营养丰富，是婴幼儿成长发育的一种主要食物。随着食品安全关注度的提高，婴幼儿配方乳粉中的药物残留日益成为关注的焦点。三聚氰胺是一种化工材料，有肾毒性，作为添加剂并没有实际作用。但不法商贩为“提高”蛋白质含量，降低生产成本，在乳粉添

3、加了三聚氰胺。氯霉素是一种广谱抗生素，能抑制细菌蛋白质的形成，但对人类也具有毒害作用，如它对骨髓造血机能有抑制作用，可引起粒细胞缺乏病、再生障碍性贫血和溶血性贫血等毒副作用。由于氯霉素价格低廉，抗病性强，给奶牛非法服用氯霉素的情况时有发生，以致乳粉中会存在氯霉素残留;甲硝唑和洛硝达唑具广谱抗厌氧菌和抗原虫的作用，主要用于预防和治疗厌氧菌引起的感染，我国已经命令禁止在饲料中添加。目前，测定氯霉素、三聚氰胺、甲硝唑和洛硝达唑的方法主要有液相色谱法［1～6］、气相色谱-质谱法［7，8］、酶联免疫法［9］及液相色谱-串联质谱法等［10～14］。液相色谱-质谱联用技术是近年来新兴的检测技术，

4、由于其准确、高效和高灵敏度，符合目前食品安全检测所追求的快速高效的要求，目前还未见液相色谱-串联质谱联用法用于同时检测氯霉素、三聚氰胺、甲硝唑和洛硝达唑的报道。本研究采用碱性乙腈提取目标物，采用高效液相色谱串联质谱仪进行检测，前处理简单，灵敏度高，适合于婴幼儿配方乳粉中氯霉素、三聚氰胺、甲硝唑和洛硝达唑的同时快速检测。2实验部分2．1仪器与试剂6410型串联三重四极杆质谱(美国Agilent公司);配Agilent1200型液相色谱仪;KQ-5200型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司);TGL-16M型高速台式冷冻离心机(湘仪离心机仪器有限公司)。Milli-Q去离子水发生器(

5、美国Milli-Q公司);乙腈、甲醇(色谱纯，Fisher公司);甲酸、乙酸铵、三乙胺、冰醋酸(分析纯，北京化工厂);氯霉素、三聚氰胺、甲硝唑和洛硝达唑(纯度≥99%，Sigma公司)。2012-06-05收稿;2012-09-03接受本文系国家质检总局质检公益性行业科研专项(No．200910267-02)资助*E-mail:haowang2003@163．com分析化学第41卷2842．2样品前处理称取4．0g样品，精确至0．01g，置于100mL比色管中，加水35mL，充分溶解后超声提取5min，再用含1%氨水的乙腈溶液定容。超声波提取20min，上清液经滤纸过滤，吸取25m

6、L滤液至100mL蒸发瓶内，于45℃水浴中减压蒸馏至3mL左右，加水充分溶解后定容至5mL，滤纸过滤后待测(如浑浊严重，以8000r/min高速离心10min，取上清液过滤)2．3标准溶液的配制标准储备液:分别称取适量的氯霉素、三聚氰胺、甲硝唑和洛硝达唑标准品，再分别用甲醇配制成0．1g/L的标准储备液，于#18℃保存。标准工作溶液:分别吸取适量标准储备液于100mL容量瓶中，用水定容，配制成标准工作溶液。4种禁用物质浓度为:氯霉素、洛硝达唑、甲硝唑:100!g/L;三聚氰胺:空白样品提取液:选择阴性样品，按2．2节操作。基质混合标准工作溶液:根据仪器的灵敏度和线性范围，吸取适量标

7、准工作溶液，用空白样品提取液配成系列浓度的基质混合标准工作溶液。10mg/L。色谱-质谱条件液相色谱条件:资生堂MGⅢ-C18色谱柱(1502．4mm×2．1mm，5!m);流速:0．20mL/min;柱温:25℃;进样量:20!L;流动相为甲醇(A相)和60mmoL/L乙酸铵缓冲溶液(含0．04%甲酸)(B相);梯度洗脱程序:0～5min，95%A;5～20min，95%～65%A;20～25min，65%～5%A;25～35min，5%A。质谱条件:电喷雾离子源(