基于新型衍生化方法的uplc_h_省略_ms单克隆抗体n_糖基化分析方法_铁偲

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1、基于新型衍生化方法的UPLC_H_省略_MS单克隆抗体N_糖基化分析方法_铁偲—1032—35（6）药物分析杂志ChinJPharmAnal2015，*基于新型衍生化方法的UPLC－HＲMS单克隆抗体N－糖基化分析方法＊胡婷，张金兰＊铁偲，（中国医学科学院药物研究所，北京100050）摘要目的：为了满足单克隆抗体药物N－糖分析的实际需要，建立稳定、灵敏、可靠的单克隆抗体药物N－糖分析的分析方法。方法：采用全新的肼基衍生化试剂对N－糖进行衍生化，并对衍生化后的N－糖进行超高效液相色谱高分辨质谱分析。采用与开源数据库比对和多级质

2、谱对检测到的N－糖进行初步定性。结果：新的肼基衍生化分析方法将单克隆抗体药物N－糖分析的灵敏度提高了2～3个数量级，与传统2－氨基苯甲酰胺（2－AB）衍生化相比，灵敏度也有3倍的提高。新的方法条件温和，保证N－糖结构的完整性，实现了多种不稳定唾液酸修饰N－糖的检出。二级质谱的应用提高了结构分析的效率与针对性。结论：本文建立了可靠、灵敏、高效的单克隆抗体药物N－糖分析方法，该方法在实际应用中具有极大的应用前景。关键词：N－糖衍生化；单克隆抗体；肼基衍生化试剂；糖基化；糖蛋白；液质联用；二级质谱中图分类号：Ｒ917文献标识码：A

3、文章编号：0254－1793—————————————————————————————————————————————————————（2015）06－1032－06doi：10.16155/j.0254－1793.2015.06.16UPLC－HＲMSN－glycanprofilingofmonoclonalantibodywithanewderivatizationmethod*＊TIECai，HUTing，ZHANGJin－lan＊（InstituteofMaterialMedica，ChineseAcademyofM

4、edicalSciences，Beijing100050，China）AbstractObjective：ToestablishanewreliableandeffectiveN－glycananalyticalmethodsoastomeetthere-quirementsinresearchesofmonoclonalantibodyN－glycans．Methods：Inthisstudy，aN－glycananalytical-strategywasdevelopedbasedonnovelderivitizatio

5、nreagentswithhydrazinegroups．DerivitizedN－glycanswereanalyzedwithHPLC－HＲMS．DetectedN－glycanswereidentifiedwithcombinedapplicationofopendatabaseandMS/MS．Ｒesults：Thenovelstrategyachievedhighersensitivitywhichwas2－3magnitudehigherthannon－deriv-itization．Evencomparedwi

6、th2－aminobenzamide（2－AB）whichwasappliedwidely，thenovelstrategyprovided3timeshighersensitivity．MildderivitizationconditionminimizeddamagetotheunstablepartsofN－glycanstoen-surethestructureintegrityandaccomplisheddetectionofN－glycanswhichweremodifiedwithmultipleunstab

7、lesialicacids．Comprehensiveapplicationofon－—————————————————————————————————————————————————————linedatabaseandMS/MSspectraenhancedtheefficiencyandse-lectivityofN－glycanstructureanalysis．Conclusion：Areliable，sensitive，andeffectiveN－glycananalyticalstrate-gywasdevel

8、opedformonoclonalantibody，whichhasagreatpotentialasaqualitycontroltoolforpharmaceuticalindustry．Keywords：N－glycan；monoclonalantibody；hydrazineder