dcsignr在人胎盘滋养层细胞中的表达及意义

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1、DCSIGNR在人胎盘滋养层细胞中的表达及意义【摘要】　　目的:探讨DCSIGNR在人胎盘绒毛组织中的定位及在体外培养滋养层细胞上的表达。方法:建立稳定的滋养层细胞原代培养体系,采用免疫组化单染及荧光双染的方法检测不同孕期正常胎盘绒毛组织及体外培养滋养层细胞上DCSIGNR的表达。结果:DCSIGNR主要表达于胎盘滋养层细胞、Hofbauer细胞及胎盘微血管内皮细胞的胞质及包膜,在原代培养的人绒毛膜滋养层细胞中的DCSIGNR的表达与在体组织表达一致。结论:DCSIGNR表达于不同孕期的胎盘组织及体外分离培养滋养层

2、细胞,为研究滋养层细胞上该受体在宫内感染中的作用提供体外实验的细胞学基础。【关键词】滋养层细胞DCSINGR免疫组织化学宫内感染　　[Abstract]AIM:TostudytheexpressionofDCSIGNRinhumanplacentaandtrophoblastcellsculturedinvitro,andprovidedabasisforexperimentinvitroaimingtoinvestigatethemechanismofreceptormediatedintrauterinetransmi

3、ssion.METHODS:Primaryculturesystemofhumanchorionictrophoblastcellswereestablished.TheexpressionofDCSIGNandDCSIGNRwasdeterminedbyImmunohistochemistry(IHC)stain.RESULTS:DCSIGNRwasmainly10expressedinthemembraneandplasminplacentaltrophoblastcells,Hofbauercellsandplac

4、entalvascularendothelialcells.CONCLUSION:TheexpressionofDCSIGNRinhumanplacentaandtrophoblastcellsculturedinvitroisdeterminedbyIHC;Thestudyprovidesacellularbasisforexperimentinvitroaimingtoinvestigatethemechanismofreceptormediatedintrauterinetransmission.　　[Keyword

5、s]trophoblastcells;DCSIGNR;IHC;intrauterineinfection　　病毒如何突破胎盘屏障的第一道防线滋养层细胞？其具体传播途径尚不明确。研究发现,病毒可通过受体介导途径侵入细胞[1]。滋养层细胞表面存在有此作用的受体。从人胎盘库中筛选出一种未知的钙离子依赖C型凝集素,后来证实就是DCSIGN[2],它因参与HIV的感染并介导免疫启动而成为凝集素家族的研究焦点。其相关同源物DCSIGNR与DCSIGN在氨基酸水平有77%的同源性,也具有吸附和传递HIV的作用。如今,DCSIGNR

6、在病理,尤其在感染形成中的作用已受到相关领域的广泛关注。　　我们建立了稳定的滋养层细胞原代培养体系,并运用免疫组化、免疫荧光等方法观察不同孕期的胎盘、10体外分离培养滋养层细胞上DCSIGNR的分布,为进一步研究滋养层细胞上这该受体在宫内感染中的作用提供体外实验的细胞学基础。　　1材料和方法　　1.1材料羊抗人DCSIGNR多克隆抗体(sc17261)浓缩液购自美国SantaCruz公司;FITC标记山羊抗小鼠荧光抗体、TRITC标记兔抗山羊荧光抗体和免疫组化SP9003试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。流产孕妇来

7、源于重庆西南医院妇产科门诊,孕8～12周,胚胎发育正常且为自愿,人工流产术中所取绒毛置于预冷的生理盐水中迅速带回实验室,立即行细胞培养。来自西南医院妇产科取不同孕期正常的胎盘绒毛组织(大小约1cm3),立即用组织体积20倍的40g/L多聚甲醛液固定,石蜡包埋(温度低于60℃)、连续切片(厚度6～7μm),用于免疫组化检测。　　1.2方法　　1.2.1滋养层细胞的分离及鉴定采用胰蛋白酶/DNase序贯消化法行人绒毛膜滋养层细胞的分离;用35%～45%的不连续Percoll密度梯度离心方法纯化细胞;抗细胞角蛋白7（CK7）抗体对分

8、离纯化细胞进行鉴定[3]。10　　1.2.2免疫组化单染、荧光双染检测DCSIGNR(1)不同孕期胎盘绒毛组织DCSIGNR染色:石蜡切片烤片(58～60)℃1h;经二甲苯、梯度酒精脱蜡至水;30mL/L过氧化氢37℃处理切片20min,封闭内源性过氧化物酶;蒸馏水冲洗,