哌嗪雌酚酮对骨质疏松小鼠骨和子宫的影响

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1、哌嗪雌酚酮对骨质疏松小鼠骨和子宫的影响作者：张延娇李青南郑虎翁玲玲【摘要】目的研究新型雌激素——哌嗪雌酚酮（PE）对去卵巢骨质疏松小鼠骨代谢及子宫的影响。方法将60只昆明种小鼠，体重30～35g，随机分6组，正常对照组，去卵巢模型组(Ovx组)，Ovx+PE0.5mg/kg组，Ovx+PE1.0mg/kg组，Ovx+PE2.0mg/kg组，Ovx+雌酚酮（E）0.71mg/kg组。去卵巢后连续灌胃给药42d，处死小鼠后行骨代谢相关指标检测、骨组织胶原染色及子宫病理学检查。结果PE能预防去卵巢小鼠的骨丢失，高剂量组有统计学意义（P<0.05），与模型组比较，中、高剂量组能够显著

2、的提高去卵巢小鼠骨内羟脯氨酸的含量(P<0.01,P<0.05)；对单位骨重骨钙、骨磷含量无明显影响；与雌酚酮组比较，对骨质疏松小鼠子宫的作用较弱。结论PE主要是通过提高骨组织胶原的含量维持骨量，对子宫表现出弱刺激作用。【关键词】哌嗪雌酚酮；骨质疏松；去卵巢；骨；子宫10　　绝经后妇女骨质疏松的发病率为50%，其病因主要是绝经后卵巢功能减退、雌激素水平降低引起骨质丢失。雌激素替代疗法(ERT)是防治绝经后骨质疏松最传统、最经典的方案〔1，2〕。然而，长期应用雌激素会增加乳腺癌和子宫内膜癌的风险。因此，寻找选择性高、副作用小的防治骨质疏松药物，成为目前新药研发的热点之一。

3、哌嗪雌酚酮（PE）是一种新的雌激素衍生物〔3〕，既往采用骨形态计量学方法证实了其对大鼠骨丢失的预防作用〔4〕。本实验以骨质疏松小鼠为动物模型，通过对骨基质的分析及骨胶原排布的影响探讨PE对绝经后骨质疏松防治的疗效。　　1材料与方法　　1.1动物及分组　　雌性昆明种（KM）小鼠60只（本院动物中心提供），体重30～35g，将小鼠随机分成6组：正常对照组(Sham组，5‰羧甲基纤维素钠)、去卵巢模型组（Ovx组，5‰羧甲基纤维素钠）、去卵巢+PE低(PEL，Ovx+PE0.5mg/kg)、中(PEM，Ovx+PE1.0mg/kg)、高剂量组(PEH，Ovx+PE2.0mg/kg)

4、和去卵巢+雌酚酮组(E组，Ovx+E0.71mg/kg)。对应组分别连续灌胃给药42d，右心室采血，处死。　　1.2实验药品及试剂　　PE（纯品），由四川大学华西药学院提供；5‰羧甲基纤维素钠购于上海化学试剂厂；羟脯氨酸（Hyp）测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所；DirectRed80购于Sigma公司。10　　1.3方法　　1.3.1骨组织参数的测定　　1.3.1.1股骨湿重（BWW）　　将软组织剥除干净的左侧股骨，于1/10万分析天平上测其湿重。　　1.3.1.2股骨干重(BDW)　　取左侧股骨，除净附着骨上的肌肉和软组织，用AE240电子天平称量湿重后于80℃烤箱烘烤72

5、h至恒重，称量此时骨重可得出股骨干重。　　1.3.1.3骨Hyp及骨钙(Ca)、骨磷（P）测定方法　　取左侧股骨，除净附着肌肉和软组织，于80℃烤箱烘烤48h至恒重，然后将每份骨标本置于10ml安瓿瓶中加入6mol/LHCl5ml，乙炔火烧安瓿瓶口密封后置于烤箱中，108℃恒温消化24h后取出过滤，取滤液，然后将滤液分成两份，一份以1∶1010稀释后用ICP(电感耦合等离子体直读光谱仪)测定微量元素的含量，根据标准品含量及样品稀释倍数计算出骨中Ca2+、P的含量；另一份滤液以1∶10稀释，调pH值至7.0～7.4后，按照Hyp测定试剂盒方法用UV752紫外分光光度计测定样品中Hy

6、p吸光度，计算样品中Hyp含量。　　1.3.2骨胶原形态学观察〔5〕　　脱钙骨制片：取右侧股骨，多聚甲醛液中固定72h后，置于15%EDTA脱钙液中脱钙4w（换新鲜EDTA脱钙液1次/w），脱钙后流水冲洗过夜，10%中性福尔马林液固定过夜，骨组织脱水，预浸蜡3h，浸蜡3h，包埋，修整蜡块后切片。各组的股骨下1/3段在矢状面石蜡切片，裱于明胶玻片上行天狼猩红(DirectRed80)胶原染色。　　1.3.3子宫组织病理学检查　　将各组雌性小鼠的每个双角子宫分别取上中段约1cm组织，然后经过常规梯度酒精脱水，二甲苯透明后浸蜡、包埋，修整蜡块后切片。子宫采用横切面连续切片，切片厚度均为4

7、μm。HE染色步骤染色，中性树胶封片。在光学显微镜下观察不同组的子宫组织的变化。　　1.4统计学方法　　数据以x±10s表示，采用SPSS13.0统计软件分析，数据经正态性和方差齐性检验后，采用单因素方差分析(onewayANOVA)的最小显著差法LSD进行组间比较。　　2结果　　2.1股骨代谢指标结果　　见表1。表1PE对骨质疏松小鼠股骨指标的影响(略)　　2.1.1去卵巢模型组的变化　　与Sham组比较，Ovx组BWW、BDW明显降低（P<0.05），Hy