浅谈哌嗪雌酚酮对骨质疏松小鼠骨和子宫的影响

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1、浅谈哌嗪雌酚酮对骨质疏松小鼠骨和子宫的影响【论文摘要】研究新型雌激素——哌嗪雌酚酮（PE）对去卵巢骨质疏松小鼠骨代谢及子宫的影响。方法将60只昆明种小鼠，体重30～35g，随机分6组，正常对照组，去卵巢模型组(Ovx组)，Ovx+PE0.5mg/kg组，Ovx+PE1.0mg/kg组，Ovx+PE2.0mg/kg组，Ovx+雌酚酮（E）0.71mg/kg组。去卵巢后连续灌胃给药42d，处死小鼠后行骨代谢相关指标检测、骨组织胶原染色及子宫病理学检查。结果PE能预防去卵巢小鼠的骨丢失，高剂量组有统计学意义（P<0.05），与模型组比较，中、

2、高剂量组能够显著的提高去卵巢小鼠骨内羟脯氨酸的含量(P<0.01,P<0.05)；对单位骨重骨钙、骨磷含量无明显影响；与雌酚酮组比较，对骨质疏松小鼠子宫的作用较弱。结论PE主要是通过提高骨组织胶原的含量维持骨量，对子宫表现出弱刺激作用。【论文关键词】哌嗪雌酚酮；骨质疏松；卵巢；子宫　　绝经后妇女骨质疏松的发病率为50%，其病因主要是绝经后卵巢功能减退、雌激素水平降低引起骨质丢失。雌激素替代疗法(ERT)是防治绝经后骨质疏松最传统、最经典的方案〔1，2〕。然而，长期应用雌激素会增加乳腺癌和子宫内膜癌的风险。因此，寻找选择性高、副作用

3、小的防治骨质疏松药物，成为目前新药研发的热点之一。哌嗪雌酚酮（PE）是一种新的雌激素衍生物〔3〕，既往采用骨形态计量学方法证实了其对大鼠骨丢失的预防作用〔4〕。本实验以骨质疏松小鼠为动物模型，通过对骨基质的分析及骨胶原排布的影响探讨PE对绝经后骨质疏松防治的疗效。　　1材料与方法　　1.1动物及分组　　雌性昆明种（KM）小鼠60只（本院动物中心提供），体重30～35g，将小鼠随机分成6组：正常对照组(Sham组，5‰羧甲基纤维素钠)、去卵巢模型组（Ovx组，5‰羧甲基纤维素钠）、去卵巢+PE低(PEL，Ovx+PE0.5mg/kg)、中(P

4、EM，Ovx+PE1.0mg/kg)、高剂量组(PEH，Ovx+PE2.0mg/kg)和去卵巢+雌酚酮组(E组，Ovx+E0.71mg/kg)。对应组分别连续灌胃给药42d，右心室采血，处死。　　1.2实验药品及试剂　　PE（纯品），由四川大学华西药学院提供；5‰羧甲基纤维素钠购于上海化学试剂厂；羟脯氨酸（Hyp）测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所；DirectRed80购于Sigma公司。　　1.3方法　　1.3.1骨组织参数的测定　　1.3.1.1股骨湿重（Bl安瓿瓶中加入6mol/LHCl5ml，乙炔火烧安瓿瓶口密封后置于烤箱中，

5、108℃恒温消化24h后取出过滤，取滤液，然后将滤液分成两份，一份以1∶10稀释后用ICP(电感耦合等离子体直读光谱仪)测定微量元素的含量，根据标准品含量及样品稀释倍数计算出骨中Ca2+、P的含量；另一份滤液以1∶10稀释，调pH值至7.0～7.4后，按照Hyp测定试剂盒方法用UV752紫外分光光度计测定样品中Hyp吸光度，计算样品中Hyp含量。　　1.3.2骨胶原形态学观察〔5〕　　脱钙骨制片：取右侧股骨，多聚甲醛液中固定72h后，置于15%EDTA脱钙液中脱钙4组织，然后经过常规梯度酒精脱水，二甲苯透明后浸蜡、包埋，修整蜡块后切片。子宫

6、采用横切面连续切片，切片厚度均为4μm。HE染色步骤染色，中性树胶封片。在光学显微镜下观察不同组的子宫组织的变化。　　1.4统计学方法　　数据以x±s表示，采用SPSS13.0统计软件分析，数据经正态性和方差齐性检验后，采用单因素方差分析(one组比较，Ovx组BWW、BDW明显降低（P<0.05），Hyp含量减少，有统计学意义（P<0.01），而单位骨的Hyp、Ca、P的含量则无明显变化；PEH组及E组的BDW、BWW增加明显，具有统计学意义。　　2.1.2E组的效应　　与Ovx组比较，E组的骨重量和Hyp的含量增加，但对单位

7、骨重的相关骨成分变化不明显，不具备统计学意义；虽能增加P、Ca的含量也未表现出统计学意义。2.1.3PE对骨质疏松小鼠的作用　　与Ovx组比较，PE能增加骨重量，但以PEH组具有统计学意义，股骨中Hyp含量增加明显，其中以PEM组作用最为显著（P<0.01）。但单位骨重的Hyp、Ca、P变化不明显。　　2.2股骨形态学观察结果　　偏振光下可见Ovx组胶原纤维断裂、变短、稀疏，排列紊乱，呈现出淡红或黄色。胶原染色也呈现出较强烈的红色折光，纤维连续，排列规律。PEM组骨基质胶原纤维呈现强烈的红色双折光，纤维连续、粗大，连接紧密，排列规

8、律。见图1。　　2.3子宫和子宫内膜的变化　　见表2。表2PE对骨质疏松小鼠子宫内膜的影响(略)　　2.3.1Ovx组的变化　　与Sham组比较，Ovx组的子宫指数