kdr mrna在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

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1、KDRmRNA在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义【摘要】探讨血管内皮生长因子受体2（KDR）与微血管密度表达与非小细胞肺癌（NSCLC）生物学行为与预后的关系。方法分别应用原位分子杂交及免疫组织化学方法检测62例NSCLC和16例肺良性瘤样病变组织中的KDRmRNA、MVD的表达。结果（1）NSCLC与肺的良性瘤样病变MVD、KDRmRNA的表达具有显著性差异（P＜0.01），肺癌MVD随KDRmRNA表达增强而增多，两者呈正相关。（2）MVD和KDRmRNA的表达在肺腺癌高于肺鳞癌（P＜0.01）两者随淋巴结转移、TNM分

2、期的进展而升高（P＜0.01）。（3）生存期＜5年者MVD和KDRmRNA的表达显著高于生存期＞5年者（P＜0.01）。结论MVD和KDRmRNA的表达与NSCLC的发生、发展、转移关系密切，可以作为评估NSCLC生物学行为及预后判断的指标，KDR可能成为NSCLC的一个潜在的抗血管生成治疗的靶点。【关键词】血管内皮生长因子受体2非小细胞肺癌原位分子杂交微血管密度　　0引言9　　肺癌的侵袭和转移是患者治疗失败和死亡的主要原因，而新生血管的生成是肺癌侵袭和转移的解剖学和生理学基础，血管内皮生长因子（Vascularendoth

3、elialgrowthfactor,VEGF）及其受体2（Kinasedomaincontainingreceptor,KDR/VEGFR2/Flk1）在促进内皮细胞的分裂与增殖，促进血管生成中起着关键作用。许多肿瘤及其血管内皮细胞均有KDR表达升高，KDR表达水平与血管内皮细胞的更新速度呈正相关。　　本研究应用原位分子杂交技术检测非小细胞肺癌（Nonsmallcelllungcancer,NSCLC）中KDRmRNA的表达，应用免疫组化SP法检测微血管密度（Microvasculardensity,MVD）的表达

4、，试图探讨KDRmRNA的表达对MVD的影响,以及KDRmRNA表达与临床病理特征及预后的相关性，以探测KDR的作用机制，为NSCLC的抗血管生成治疗提供理论依据。　　1材料与方法　　1.1临床资料选用1999年3月至2000年3月我院心胸外科手术切除并经病理学确诊的NSCLC标本62例，其中男44例，女18例；年龄37～76岁，平均55.9岁。所有患者术前均未行放疗和化疗，经影像学检查确认无远处转移。按WHO《肺肿瘤组织学分型》（1981）标准，包括肺鳞癌27例，肺腺癌35例。组织学分级为Ⅰ级7例，Ⅱ级25例，Ⅲ级30例。按

5、UICC（1997）肺癌分期标准，包括Ⅰ期17例，Ⅱ期10例，Ⅲ期33例，Ⅳ9期2例。肿瘤长径为1.8㎝～11.0㎝，平均5.0㎝。有淋巴结转移39例，无淋巴结转移23例。其中42例有完整随访资料，生存期≤5年者32例，＞5年者10例。另选同期肺良性瘤样病变16例（其中结核球11例，炎性假瘤3例，浆细胞肉芽肿1例，纤维软骨脂肪瘤1例）组织标本作对照。　　1.2主要试剂CD34鼠单抗、免疫组化SP试剂盒和DAB显色试剂购自福州迈新生物技术开发有限公司，KDRmRNA原位杂交试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司。　　1.3实验方

6、法石蜡块标本制成4μm切片，原位分子杂交采用胃蛋白酶暴露mRNA核酸片断，参照试剂说明书进行，以细胞胞质内出现棕黄色颗粒为阳性杂交信号，少量胞核也有阳性信号，无阳性信号为阴性。免疫组织化学染色程序按SP试剂盒说明书进行，同时用已知的阳性切片在同条件下染色作为阳性对照，用PBS代替一抗作为空白对照。　　肿瘤MVD的测量应用HPIAS－2000型全医学彩色图像分析系统分析处理。参照Weidner方法[1]，先在低倍光镜（×20，×100）下扫描整张切片，确定3个高血管密度区，即“热点”，再在高倍镜（×400）下计数被染成黄色的微

7、血管数目，结果用3个高倍镜视野下微血管数目的平均数表示。9　　1.4统计学处理使用SPSS11.5统计软件包，两个均数之间的比较用studentt检验，计数资料用χ2检验。　　2结果　　2.1MVD与NSCLCNSCLC组织内微血管密度分布，相互间联系紧密，MVD平均为43.78±12.46；肺良性瘤样病变微血管分布均匀且少，MVD平均为7.42±4.12，NSCLC较肺良性瘤样病变显著升高（P＜0.01）（表1）。从表1还可以看出，肺腺癌组织MVD明显高于鳞癌组织（P＜0.05），Ⅲ＋Ⅳ期组MVD明显高于Ⅰ＋Ⅱ期组（P＜0.

8、05），有淋巴结转移组MVD明显高于无淋巴结转移组（P＜0.05），而不同组织学分级与肿瘤大小间无显著性差异。　　2.2KDRmRNA与NSCLCKDRmRNA阳性信号以胞质出现棕黄色或棕褐色颗粒判断（图1、2）。由表1可见，KDRmRNA表达在肺癌高、中、低分化组织中依次上