双试剂苦味酸法测定血清肌酐的改进

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1、双试剂苦味酸法测定血清肌酐的改进【摘要】目的消除胆红素对碱性苦味酸法测定肌酐的负干扰。方法用双液体试剂中的RI液和标本进行反应，使胆红素氧化成胆绿素，再进行肌酐的测定，并与原法做对比。结果原法受胆红素的干扰，本法可有效消除胆红素的影响。结论双液体两步法消除了胆红素对肌酐测定的干扰。此方法操作简单，结果可靠，经济实用，适合推广。【关键词】肌酐胆红素苦味酸速率法Improvementofmethodofdouble-reagentwithpicricacidfordeterminationofserumcreatinine［Abstract］ObjectiveTominimizebil

2、irubininterferenceondeterminationofserumcreatinine.MethodsSerumcreatinine（Cr）wasdeterminedaftercoversionbetweenbilirubinandbiliverdininthereactionofRIreagentwithbloodsample，andcorrelationwasdonewiththeKineticJaffe’smethod.ResultsThedouble-reagentmethodcouldminimizebilirubininterferenceinplasma

3、creatinineassays,andthemaininterferenceinusingKineticJaffe’smethodforthedeterminationofcreatininewasbilirubin.ConclusionThedouble-reagentmethodcanminimizebilirubininterferencein6plasmacreatinineassaysandispractical，reliable，henceitworthsgeneralizing.［Keywords］creatinine；bilirubin；kineticJaffe’

4、smethod碱性苦味酸速率法测定的原理是肌酐同碱性苦味酸反应形成一种红色复合物，通常在510nm处根据测定一定时间（20～80s）内血清和标准液吸光度的增加量计算肌酐的含量。而胆红素在510nm处也有较强光吸收，并且在氢氧化钠的作用下，逐渐转化为620nm处有强光吸收的胆绿素，而胆绿素在520nm处只有很弱的光吸收，这样就掩盖了肌酐本身的显色反应的表现，从而使测定结果偏低，甚至出现负值［1］。经过查阅有关文献和多次实验，发现胆红素在37℃和强碱环境下被氧化成胆绿素［2］，导致510nm处吸光度减少的时间为两者混合后50s以内，50s以后510nm吸光度下降缓慢或基本不变。我们根据

5、这一发现并结合BECKMAN-CX5型全自动生化分析仪的特点，将原来的双液体试剂反应步骤进行了改进，把原来的一步法改为两步法（以下原方法和改良方法简称为一步法和两步法）。这种改进后的方法可以有效地消除胆红素对肌酐测定的负影响。61材料与方法1.1试剂碱性苦味酸试剂（试剂R1：300mmol／L氢氧化钠；试剂R2：20mmol／L苦味酸）由上海丰汇医学科技公司提供。肌酐标准液、高、中、低定值质控血清：美国进口。仪器：BECKMAN-CX5型全自动生化分析仪。1.2方法（1）20μl血清（TBIL：408μmol/L）与200μl试剂R1（300mmol／L氢氧化钠）混合后，连续检测该

6、混合物分别在520nm和620nm处吸光度的变化。结果发现48s以后520nm吸光度下降缓慢或基本不变，而620nm处吸光度在32s后上升缓慢或基本不变。胆红素被氧化成胆绿素的反应主要发生在标本和RI液混合后50s以内。（2）根据上述发现并结合BECKMAN-CX5型全自动生化分析仪的特点，调整后的反应参数。20μl血清与200μl试剂R1（300mmol／L氢氧化钠）反应16s后加入50μl试剂R2（20mmol／L苦味酸），在试剂R2加入后16s读取起始吸光度（A1），再过48s读取终末吸光度（A2），计算时用A2-A1=ΔA，肌酐的含量为:肌酐（μmol/L）=样品ΔA/标准

7、ΔA×标准浓度（μmol/L）。主波长520nm，副波长560nm，反应温度37℃。2结果62.1两种方法的比较选取胆红素和肌酐正常参考值范围的低值定值质控血清（TBIL10.7μmol/L、CREA46μmol/L），分别用一步法和两步法在BECKMAN-CX5型全自动生化分析仪各连续测定测定肌酐浓度20次，一步法测定结果:x=45.8μmol/L，s=2.231,CV=4.9%；两步法测定结果x=47.0μmol/L,s=2.066,CV=4.4%。经配对t检验，