土壤中拮抗放线菌的筛选与鉴定

《土壤中拮抗放线菌的筛选与鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、土壤中拮抗放线菌的筛选与鉴定一、培养基1放线菌培养基高氏一号液体培养基：可溶性淀粉20g，KNO31g，K2HPO40.5g，NaCl0.5g，MgSO4.7H2O0.5g，FeSO4·7H2O0.01g，H2O1000mL，pH7.2～7.4。黄豆粉固体培养基：大豆粉20g（沸水煮30min，过滤保留滤液），蔗糖10g，可溶性淀粉5g，蛋白胨2g，酵母膏2g，NaCl2g，CaCO31g，MgSO4·7H2O0.5g，KH2PO40.5g，琼脂15g，H2O1000mL，初始pH7.0。放线菌发酵培养基：大豆粉20g（沸水煮3

2、0min，纱布过滤后保留滤液），蔗糖10g，可溶性淀粉5g，蛋白胨2g，酵母膏2g，NaCl2g，CaCO31g，MgSO4·7H2O0.5g，KH2PO40.5g，H2O1000mL，初始pH7.0。2放线菌形态及培养特征研究用培养基察氏培养基（ISP1）：蔗糖30g，NaNO32.0g，K2HPO41.0g，MgSO4.7H2O0.5g，KCl0.5g，FeSO4·7H2O0.01g，H2O1000mL，pH7.2～7.4。麦芽膏－酵母膏培养基(ISP2)：酵母膏4.0g，葡萄糖4.0g，麦芽膏10.0g，微量盐溶液1mL，

3、H2O1000mL，琼脂20g，pH7.0～7.4。燕麦片培养基（ISP3）：燕麦片20g（加1000mL水煮20分钟，然后用离心或过滤得澄清滤液并补足1000mL），微量盐溶液1mL，pH7.2（微量盐溶液：FeSO4.7H2O0.1g，MnCl2.4H2O0.1g，ZnSO4.7H2O0.1g，H2O100mL）。甘油-天门冬酰胺培养基（ISP5）：L-天门冬酰胺1.0g，甘油10.0g，K2HPO41g，微量盐溶液1mL，琼脂20g，pH7.0～7.4。无机盐淀粉培养基：可溶性淀粉10g，K2HPO41.0g，MgSO4.

4、7H2O1.0g，CaCO32.0g，(NH4)2SO42.0g，微量盐溶液1mL，H2O1000mL，pH7.4。马铃薯培养基：去皮马铃薯块200g（1000毫升水，80℃煮１小时，然后离心或过滤得上清液），葡萄糖20g，pH7.4。营养琼脂培养基：蛋白胨10g，牛肉膏5.0g，H2O1000mL，pH7.4（亦可补加葡萄糖10g）。葡萄糖-天门冬酰胺培养基：葡萄糖10g，L-天门冬酰胺0.5g，K2HPO40.5g，牛肉膏2g，H2O1000mL，pH7.2。3测定生理生化特性供试培养基淀粉水解测定培养基：可溶性淀粉10g，

5、K2HPO45.65g，NaCl0.5g，KNO31g，MgCO31g，琼脂15g，H2O1000mL，pH7.2~7.4。纤维素水解培养基：MgSO4.7H2O0.5g，NaCl0.5g，K2HPO40.5g，KNO31g，H2O1000mL。滤纸条（5cm×0.8cm）灭菌20分钟。（pH7.0～7.2）明胶液化培养基：蛋白胨5g，葡萄糖20g，明胶200g，H2O1000mL，明胶灭菌10min，pH7.0（灭菌3次，每次20min，灭菌后立即浸入冷水中冷却。）牛奶凝固与胨化培养基：脱脂牛奶1000mL，CaCO30.02

6、g，pH7.2~7.4，间歇灭菌三次（脱脂牛奶的制备：取新鲜牛奶，煮沸后冷却，经两次离心（3000r/min，10min）脱脂，除去上层油脂，即得脱脂牛奶）。石蕊溶液配制：称取2.5g石蕊浸泡在100ml蒸馏水中过夜，使石蕊充分溶解，然后过滤备用。石蕊牛奶的制备：2.5％的石蕊液与脱脂牛奶以4：100（V/V）比例混合，牛奶呈紫丁香色，分装于试管中，灭菌备用。接种前抽检灭菌是否彻底。硫化氢产生测试培养基（柴斯钠培养基）：蛋白胨10g，柠檬酸铁0.5g，K2HPO41g，琼脂15g，H2O1000mL，pH7.2。黑色素产生培养基

7、：酪氨酸（L-Tyr）1g，酵母膏1g，NaCl8.5g，琼脂20g，H2O1000mL，pH7.2。硝酸盐还原试验培养基：MgSO4.7H2O0.5g，NaCl0.5g，K2HPO40.5g，KNO31g，NaCl0.5g，H2O1000mL，A溶液：对氨基苯磺酸0.5g，醋酸（80％醋酸，加2倍水稀释）150mL；B溶液：二苯胺0.1g，H2O20mL)二苯胺试剂（二苯胺0.5g溶于100mL浓硫酸中，用20mL蒸馏水稀释）碳源利用培养基：（NH4）2SO42.64g，KH2PO40.5g，K2HPO40.5g，MgS04.

8、7H2O0.5g，CuSO4.5H2O0.0064g，FeSO4.7H2O0.0011g，MnC12.4H2O0.0079g，ZnsO4.7H2O0.00l5g，琼脂粉15.0g，蒸馏水1000mL。二、实验操作步骤1拮抗菌的形态鉴定1）菌株形态学特征观察采用插