土壤放线菌分离菌株的分类鉴定与拮抗性筛选

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1、土壤放线菌分离菌株的分类鉴定与拮抗性筛选韩秀芳2015年1月中图分类号UDC分类号土壤放线菌分离菌株的分类鉴定与拮抗性筛选作者姓名韩秀芳学院名称生命学院指导教师张建丽教授答辩委员会主席冯永君教授申请学位级别理学硕士学科专业生物学学位授予单位北京理工大学论文答辩日期2015年1月TaxonomicidentificationandresistancescreeningofactinomycetesCandidateName：XiufangHanSchoolorDepartment:SchoolofLifeSci

2、enceFacultyMentor:Prof.JianliZhangChair,ThesisCommittee：Prof.YongjunFengDegreeApplied:MasterofScienceMajor：BiologyDegreeby:BeijingInstituteofTechnologyTheDateofDefence：January,2015研究成果声明本人郑重声明：所提交的学位论文是我本人在指导教师的指导下进行的研究工作获得的研究成果。尽我所知，文中除特别标注和致谢的地方外，学位论文中不包含

3、其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得北京理工大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的合作者对此研究工作所做的任何贡献均已在学位论文中作了明确的说明并表示了谢意。特此申明。签名：日期：北京理工大学硕士学位论文摘要本文首先介绍了放线菌在生物分类中的地位和多相分类在放线菌分类鉴定中的应用，同时对向日葵菌核病的发生概况进行了描述。采用玻璃珠摇床震荡的方法对采自南极和内蒙古的土壤进行预处理，使用不同的选择性培养基对土样样品中的微生物进行分离筛选和结果分析。南极土样样品分离得到42株菌株，

4、芽孢杆菌的数量占43%，优势放线菌为节杆菌属。其中编号E3T的菌株与其亲缘关系最近种(ArthrobactercryoconitiCGMCC1.10698T)16SrDNA的序列相似性为98.54%，通过DNA-DNA分子杂交实验，将其初步判断为节杆菌属的新种，然后对其进行系统分类。内蒙古土样样品分离得到31株菌株，对所有分离菌株的16SrRNA基因序列进行测定和分析，无疑似新种的发现，链霉菌的数量占68%，稀有放线菌的数目相对较少。研究表明，菌株E3T好氧，革兰氏阳性，无运动性，与节杆菌属中亲缘关系最近的种

5、分别是ArthrobactercryoconitiCGMCC1.10698T(98.54%)，ArthrobacterstackebrandtiiCCM2783T(98.33%)和ArthrobacteralpinusDSM22274T(98.05%)，但DNA-DNA同源性分别为24.32%，23.52%和21.22%，均低于70%。主要甲基萘醌的组分是MK-9(H2)（55%）、MK-8(H2)（40%）和MK-10(H2)（5%），脂肪酸的主要成分是anteiso-C15:0（77.28%）、iso-C

6、16:0（7.40%）、anteiso-C17:0（4.46%）和iso-C14:0（3.07%）。其磷脂类酸的类型为PIM，PI，PG，DPG，GL和未知磷酸类脂。综合菌株E3T的形态特征、细胞化学分析、生理生化特性及分子分类研究结果，确定其为节杆菌属新种并指定为该种内模式种，命名为南极节杆菌(Arthrobacternanjiensissp.nov.)。利用平板对峙试验的方法，测定分离自内蒙古向日葵试验田的31株放线菌对向日葵核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)的抑制作用，结果表明菌株

7、F5具有明显的拮抗效果，抑菌带宽度17.83mm，且转代后拮抗活性稳定。菌株F5及其发酵滤液对向日葵均有明显的抑制作用，发酵滤液亦能抑制菌核的萌发。经形态观察及16SrDNA测序分析，将F5鉴定为链霉菌(Streptomycessp.)。关键词：放线菌；节杆菌属；多相分类；系统发育；核盘菌I北京理工大学硕士学位论文AbstractThispaperfirstlydescribedthestatusofactinomycetesclassificationandtheapplicationofpolyphasi

8、ctataxonomyinclassificationandidentificationofactinomycetes,theoverviewofsunflowersclerotiotiniadiseasewerealsostated.Bycombiningphysicaltreatmentsofvibrationwithdifferentselectivemedia,andtheseparatio