rhGCSF对小鼠骨髓间充质干细胞的动员作用.doc

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1、rhGCSF对小鼠骨髓间充质干细胞的动员作用作者：刘岐焕，程范军，陈龙，唐俊明，王家宁，高清平【摘要】为了研究rhGCSF体内应用对小鼠骨髓间充质干细胞（MSC）的动员作用，将30只小鼠随机分为2组：rhGCSF组和对照组，分别给予皮下注射rhGCSF80μg/（kg·d）和等量生理盐水,连续5天，在最后1次注射后分别于6，12和168小时取小鼠骨髓和外周血，以1×106单个核细胞（MNC）接种于12孔培养板14天，对形成的成纤维细胞集落（CFUF）进行计数，用胰蛋白酶消化后应用流式细胞术测定表面抗原并进行成脂，成骨诱导。结果表明：rhGCSF组骨髓形成的CFUF数

2、均较对照组明显增加(p<0.01)。6小时取材较12小时,168小时取材形成的CFUF数目多(p<0.01)，12小时与168小时CFUF差异无统计学意义。流式细胞术检测骨髓CFUF显示CD34－、CD133－、CD90＋、CD105＋，骨髓CFUF具有成脂、成骨分化的能力。rhGCSF组6小时取材外周血具有类似骨髓的CFUF，出现的频率为（0.50±0.11）×10-6，与对照组比较差异有显著性（p<0.05）。结论：rhGCSF可使小鼠骨髓间充质干细胞增殖加速，但时间短暂，其高峰在rhGCSF应用5天后的6小时内。rhGCSF对小鼠间充质干

3、细胞也有动员能力，但作用较弱。【关键词】骨髓间充质干细胞EffectsofrhGCSFonMobilizationofMouseMesenchymalStemCellsAbstractToevaluatetheeffectsofrhGCSFonmobilizationofmesenchymalstemcells(MSCs)ofmousebonemarrowatdifferenttimepoint,thirtymicewererandomlydividedintorhGCSFtreatmentgroupandcontrolgroup.Themiceweresubcutaneo

4、uslyinjectedwithrhGCSFinadoseof80μg/kgorsalinefor5days.Thebonemarrowandperipheralbloodwereobtainedattimepointsof6,12,168hoursafterfinalinjectionofrhGCSForsaline.Bonemarrowmononuclearcells(BMMNCs)wereseededatdensityof1×106MNCsonto12wellplateforcultureexpansioninDMEMsupplementedwith10%FBS,an

5、dthenumberofcolonyformingunitfibroblast(CFUF)wascountedafter14days.ThecellswerecollectedbytrypsinizationandthesurfaceantigensCD34,CD133,CD90andCD105wereanalyzedbyflowcytometry.ThemultidifferentiationofMSCsweredoneinthecultureconditionofinducedadipocyteandosteocyte.PeripheralbloodMNCsexami

6、nationwassameasthebonemarrow.TheresultsindicatedthatthenumberofCFUFofbonemarrowinrhGCSFgroupwasmorethanthatincontrolgroup(p<0.01)，thenumberofCFUFinrhGCSFgroupat6hourswasmorethanthatat12hoursand168hours,7respectively(p<0.01).TherewasnoobviousdifferencebetweenCFUFat12hoursandat168hou

7、rs(p>0.05).MSCswerepositiveforCD90,CD105andnegativeforCD34andCD133.MSCswerefoundtodifferentiateintoadipocyteandosteocyteinvitro.TheCFUFofPBMNCsobtainedandculturedinvitrointhesamecultureconditionscouldbeobservedaftertherhGCSFinjectionat6h