SNT2847-2011水貂阿留申病检疫技术规范.pdf

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1、版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２８４７—２０１１水貂阿留申病检疫技术规范犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲狆狉狅狋狅犮狅犾犳狅狉犪犾犲狌狋犻犪狀犱犻狊犲犪狊犲狅犳犿犻狀犽２０１１０２２５发布２０１１０７０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２８４７—２０１１版权所有·禁止翻制、电子发售前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国吉林出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、中国农业科学院特产研究

2、所。本标准主要起草人：王伟利、孟庆峰、柏亚铎、肖成蕊、孟日增、石建平、姜焱、宋战昀、闫喜军、刘和平、罗雁非、王振国。Ⅰ犛犖／犜２８４７—２０１１版权所有·禁止翻制、电子发售水貂阿留申病检疫技术规范１范围本标准规定了水貂阿留申病的检疫技术规范，包括病原分离鉴定、对流免疫电泳、ＰＣＲ及荧光ＰＣＲ等鉴别诊断技术。本标准适用于进出境水貂的阿留申病检疫、疫情监测和流行病学调查。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格和试验方法３

3、临床诊断３．１概况水貂阿留申病（ａｌｅｕｔｉａｎｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）又称浆细胞增多症，是一种由主要侵害水貂免疫细胞的阿留申病毒（ａｌｅｕｔｉａｎｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ，ＡＤＶ）引起的，导致自身免疫系统紊乱并逐渐衰竭，同时并发强烈的自身免疫的慢性传染性疾病。３．２发病症状病貂精神沉郁，嗜睡，渴欲猛增，常在水槽中暴饮，食欲时好时坏；贫血，抓捕时齿龈易出血，可视黏膜苍白，口腔黏膜、齿龈和软腭上出现出血和溃疡；排煤焦样便，多死于尿毒症，进行性消瘦，生长缓慢，营养不良，体重减轻。病程数周、数月不等。个别貂具有神经症状，表现抽搐、痉挛、步态蹒跚，共济失调或后肢麻痹等症状。３．３病理变化血液

4、变化主要表现在浆细胞增多和血清丙种球蛋白量增加。丙种球蛋白可从正常貂的１ｇ／１００ｍＬ血清，增至４ｇ／１００ｍＬ～５ｇ／１００ｍＬ。病理剖检变化死貂尸体高度消瘦，多数病例有腹水，表现肝变性或不同程度的肿胀，质地增厚、淤血、呈红褐色，实质内有小坏死灶；肾肿大，充血，表面散在斑点状出血，高低不平，肾小球的基膜模糊不清，出现萎缩；脾和淋巴结显著肿大，呈暗红色；心脏扩张；肺气肿、有出血点；脑膜充血。３．４流行病学病貂和隐性感染水貂是本病的传染源，病毒通过粪便、唾液、尿液等途径排除和扩散，通过消化道、呼吸道感染，也可通过胎盘直接传染给后代。本病常年流行，没有年龄、性别的明显区别，成年水貂感染

5、率高于育成水貂，新生仔兽感染率较低，随着月龄逐日增加，该病对母貂危害更大，病貂几乎均以死亡告终。秋、冬交际变冷的季节，感染水貂的发病率和死亡率明显高于其他季节。由于本病在临床上主要是经过缓慢，呈隐性感染较多，临床症状不典型，且易与其他疾病相混淆，根据本病在流行病学、症状和病理变化只能作出初步诊断。进一步确诊须通过实验室检查。１犛犖／犜２８４７—２０１１版权所有·禁止翻制、电子发售４病原分离鉴定４．１仪器、试剂与材料４．１．１仪器生物安全柜、二氧化碳培养箱、倒置显微镜、高速冷冻离心机、组织匀浆器。移液器［移液器（２００μＬ～１０００μＬ、２０μＬ～２００μＬ）、吸管（５ｍＬ、１０ｍＬ

6、）］细胞培养瓶。４．１．２材料与试剂除特别说明以外，本标准所用试剂均为分析纯，试验用水应符合ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格。培养液、维持液、胰蛋白酶溶液（配制方法见Ａ．１～Ａ．５）、新生犊牛血清、青霉素、链霉素。４．１．３细胞猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）。４．２病料采集与处理４．２．１组织脏器的采集与处理无菌取病貂的肝、肾、脾、肠细膜淋巴结等组织脏器各２ｇ，按１∶１０的比例用不含犊牛血清的ＤＭＥＭ培养液制成匀浆，反复冻融三次，３０００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，取上清液经０．２２μｍ微孔滤膜过滤，加入抗菌素至终浓度为青霉素２００ＩＵ／ｍＬ，链霉素２００μｇ／ｍＬ，冷藏备用。４．２．２

7、粪便、尿、血清及全血样品采集与处理４．２．２．１取粪便２ｇ，按１∶１０的比例用不含犊牛血清的ＤＭＥＭ培养液制成悬液，然后１２０００ｒ／ｍｉｎ，离心３０ｍｉｎ，取上清液经０．２２μｍ微孔滤膜过滤，加入抗菌素至终浓度为青霉素２０００ＩＵ／ｍＬ，链霉素２０００μｇ／ｍＬ，冷藏备用。４．２．２．２取尿液样品５ｍＬ，１２０００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，取上清液经０．２２μｍ微孔滤膜过滤，加入抗菌素至终浓度为青霉素２０００ＩＵ／ｍＬ，链霉素２０００μｇ／ｍＬ，冷藏备用。４．２．２