禽霍乱、大肠杆菌病和克雷伯菌病多价蜂胶三联灭活疫苗的研制

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1、万方数据《黑龙江畜牧兽医》科技版2009年8月(上)99国雷函Q爨固霈固确国宙日他固圃侈倚陷鏖量圈露弱国固国四圃金天明1，谷禹2，马文芝1，周淑云1，李富桂1，郭亮1，张建斌1(1．天津农学院天津市水产生态及养殖重点实验室，天津300384；2．天津市北辰区畜牧水产局，天津300400)中图分类号：$852．5文献标识码：B文章编号：1004—7034(2009)08—0099—02关键词：禽霍乱；大肠杆菌病；克雷伯茵病；蜂胶；三联灭活疫苗摘要：利用禽巴氏杆菌CA8—1、C48—2强毒株、禽大肠杆菌O，。和O，血清型强毒株及克雷伯茵临床分离株制苗，通过疫苗对

2、鸡的免疫效力试验、疫苗最小免疫剂量试验、疫苗产生坚强免疫力时间的测定、疫苗免疫期的测定和疫苗保存期的测定等，研制出禽霍乱、大肠杆菌病和克雷伯菌病多价蜂胶三联灭活疫苗。结果该三联灭活疫苗安全可靠，免疫原性良好，最小免疫剂量为0．5mL／只，免疫7d后产生坚强保护力，疫苗对上述疾病的保护率为100％，免疫期为6个月，4cc条件下保存期为9个月。禽霍乱是由Fo型禽多杀性巴氏杆菌感染引起的疾病，急性病例的特征是在黏膜和各器官上有出血点，慢性病例在肝脏上可发现局部坏死区。该病的发病率和死亡率很高，常给养禽业造成严重的经济损失。鸡大肠杆菌病是由某些致病性血清型大肠杆菌引

3、起的一类疾病的总称，是严重危害养鸡业发展的细菌性传染病之一。克雷伯菌又称费里兰德杆菌，广泛存在于自然界中，长期以来人们都认为它只是一种条件致病菌，对畜禽危害不大，一直未引起重视，近年来该菌引起的感染日益增多。目前，对上述疾病的防治国内多以药物为主。由于上述细菌极易产生耐药性，l临床疗效不理想。笔者在已有研究的基础上，研制了禽霍乱、大肠杆菌病和克雷伯菌病多价蜂胶三联灭活疫苗，现将结果报道如下。1材料与方法1．1材料1．1．1毒种选择鸡多杀性巴氏杆菌C48—1和CA8—2强毒株，由天津农学院基础兽医学实验室提供；鸡致病性大肠杆菌0，。和0。血清型强毒株，购自中国

4、兽药监察所；鸡克雷伯菌，临床分离株。1．1．2培养基马丁肉汤、含0．1％裂解红细胞全血和4％健康动物血清的改良马丁琼脂平板、麦康凯琼脂平板，购自天津市生化试剂有限公司。收稿日期：2008—07—07：修回日期：2009—04—23基金项目：天津市高等学校科技发展基金计划项目(20060720)天津农学院科学研究发展基金计划重点项目(2006001)作者简介：金天明(1968一)，男，副教授，博士．1、1．3试验用鸡60日龄健康鸡，隔离条件下饲养，经检测禽多杀性巴氏杆菌抗体、鸡大肠杆菌抗体和鸡克雷伯菌抗体均为阴性。1．1．4效力攻毒用的强毒株在攻毒前用制苗菌株

5、通过鸡体进行增强试验，巴氏杆菌攻毒量为0．2mL／只，大肠杆菌为0．5mL／只，克雷伯菌为0．5mL／只。1．2方法1．2．1制苗鸡多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌和克雷伯菌灭活菌液按《兽用生物制品规程》中的方法制备。1．2．2配苗分别取5份鸡多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌和克雷伯菌灭活菌液(含菌量分别为3．0X109-个／mL、2×1010个'／mL和1．8X1010个'／mL)，分别加l份灭菌氢氧化铝胶，充分混匀后静置沉淀2—4d，弃部分上清液，分别浓缩至全量的3／4，取样进行无菌检验；将无菌检验合格的浓缩菌液按3：1：1的比例混合，调整菌液浓度在1．5×10旧CFU

6、／mL以上；上述浓缩灭活菌液按混合后总量的0．005％加人硫柳汞，充分混匀。1．2．3疫苗检验物理性状、无菌检验、安全性检验等均按《兽用生物制品规程》中的方法进行。1．2．4疫苗对鸡的免疫效力试验将试验鸡分成5组(三联疫苗组、禽巴氏杆菌单苗组、大肠杆菌单苗组、克雷伯菌蜂胶疫苗组和生理盐水对照组)，前4组每组10只鸡，生理盐水对照组5只鸡，免疫剂量为0．5mlM只，免疫后14天连同生理盐水对照组用致死量禽霍乱、大肠杆菌和发病量克雷伯菌混合菌液攻万方数据100毒，测定免疫效力，攻毒后连续观察14d，记录各组死亡和发病情况。1．2．5三联疫苗最小免疫剂量试验将试验

7、鸡随机分成3组，2个试验组每组10只鸡，生理盐水对照组15只，试验组免疫剂量分别为O．5mL／只和1．0mL／只，生理盐水对照组注射的生理盐水剂量为0．5mE／只。免疫7d后分别用半数致死量禽巴氏杆菌、大肠杆菌和发病量克雷伯菌混合菌液攻毒，测定免疫效力，攻毒后连续观察14d，记录各组发病和死亡情况。1．2．6三联疫苗产生坚强免疫力时间的测定将试验鸡分成2组(三联疫苗免疫组和生理盐水对照组)，免疫组为30只鸡，免疫剂量为0．5mL／只，生理盐水对照组为15只鸡，于免疫后5，7，14天分别取10只用致死量禽霍乱、大肠杆菌、克雷伯菌混合菌液攻毒，同时生理盐水对照组

8、取5只鸡攻毒，测定坚强免疫力产生的时间，攻毒后连续观