犬链球菌、犬源巴氏链球菌和肺炎克雷伯菌三联灭活疫苗的研制

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1、分类号密级UDC单位代码硕士专业学位论文犬链球菌、犬源巴氏链球菌和肺炎克雷伯菌三联灭活疫苗的研制DevelopmentofTripleInactivatedVaccineofStreptococcusCanis,StreptococcusPasteurianusandKlebsiellaPneumoniae研究生姓名姜世浩指导教师尹燕博教授第二导师徐彪研究员学位种类兽医硕士中国.青岛2018年6月QingdaoAgriculturalUniversityTheThesisofProfessionalMasterDevelopmentoftripl

2、einactivatedvaccineofStreptococcuscanis,StreptococcuspasteurianusandKlebsiellapneumoniaeGraduatewithProfessionalMasterDegree：JiangShihaoMentor:Prof.YinYan-boSecondMentor:Prof.XuBiaoTypeofProfessionalDegree：MasterofVeterinaryMedicineQingdao.ChinaJune,2018独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师

3、指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论

4、文的全部或部分内容。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日青岛农业大学硕士学位论文摘要犬链球菌、犬源巴氏链球菌和肺炎克雷伯菌三联灭活疫苗的研制摘要本研究针对非病毒性肺炎的犬只分离出犬链球菌、犬源巴氏链球菌和肺炎克雷伯菌，制备了铝胶佐剂的犬链球菌、犬源巴氏链球菌和肺炎克雷伯菌三联灭活疫苗并对其免疫保护效果等相关试验进行了研究。主要内容如下：试验一犬链球菌、犬源巴氏链球菌、犬肺炎克雷伯菌的分离鉴定首先利用PCR检测犬细小病毒、犬腺病毒、犬瘟热病毒以及犬副流感病毒四种常见病毒，阴性结果排除了病毒病的原因。通过对青岛某比格犬养殖公司送检的116份

5、死淘犬进行剖检和细菌分离，对得到细菌进行观察形态特征、生物化学试验、革兰氏染色并镜检、药敏试验以及16SrRNA基因序列分析。结果显示：分离到23株犬链球菌、11株犬源巴氏链球菌和13株肺炎克雷伯菌。分别对小鼠进行三种细菌的人工发病试验，表现出与病死犬相似的病理变化，且从小鼠体内再次分离到该三种细菌，由此确定犬链球菌、犬源巴氏链球菌和犬肺炎克雷伯菌均存在致病力。试验二犬链球菌、犬源巴氏链球菌和肺炎克雷伯菌三联灭活疫苗的研制本试验分别建立了犬链球菌、犬源巴氏链球菌和肺炎克雷伯菌的生长曲线和标准曲线，完成犬链球菌、犬源巴氏链球菌和肺炎克雷伯菌三联灭活

6、疫苗的研制。生长曲线是根据培养时间与吸光度OD600值的比值确定的一条曲线。标准曲线是通过吸光度OD600值与菌数的比值确定的一条曲线。制备抗原时可根据菌液的OD600值确定菌数。灭活三种细菌，离心弃上清后按1：1：1混合，经灭菌生理盐水稀释，与佐剂按4:1的比例制备成铝胶疫苗。经无菌检验、疫苗安全性检验及物理性状检验，均合格。试验三犬链球菌、犬源巴氏链球菌和肺炎克雷伯菌三联灭活疫苗免疫效果试验本试验将研制成功的三联灭活疫苗分别以0.5mL/只的免疫剂量皮下注射小鼠，免疫21d后攻毒保护试验、病理学观察；以1.0mL/只的免疫剂量皮下注射妊娠比格

7、犬，观察仔犬的肺炎发病率，通过上述试验评价分析三联灭活疫苗的免疫效果。在攻毒保护试验之前需要做每种细菌的半数致死量测定。结果显示：在小鼠中犬链球菌、犬源巴氏链球799菌、肺炎克雷伯菌的半数致死量分别为5×10CFU/mL，1×10CFU/mL，1×10CFU/mL；小鼠的攻毒保护率分别为60%、100%、80%，同时对照组小鼠的死亡率分别为90%、青岛农业大学硕士学位论文摘要80%、100%，表明三联灭活疫苗在免疫后21d可提供免疫保护；妊娠母犬在产前30d免疫，试验组与对照组仔犬出生后的肺炎发病率分别为4.08%和30.69%，显著降低了仔犬的

8、肺炎发病率。关键词：犬链球菌;巴氏链球菌;肺炎克雷伯菌;灭活疫苗青岛农业大学硕士学位论文AbstractDevelopmentoftri