无菌检查与微生物限度检查ppt课件

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1、2010版中国药典无菌检查法和微生物检查法介绍与思考山东省药品检验所丁勃0531-81216552山东省药品检验所自2002年微生物专业委员会成立至今，我国药品微生物检验有了革命性的进步，2005版药典明确了对检测环境的要求、对标准的制订原则做了科学的修订及引入验证理念等；2010版药典增加对培养基适用性检查、新增了药品微生物实验室规范指导原则等4个附录。从人员、培养基、菌种、实验室的布局和运行、设备、文件、实验记录、结果的判断等方面提出了明确的要求。山东省药品检验所微生物实验室建设问题无菌检查常见问题微生物限度检

2、查常见问题抑菌效力检查法山东省药品检验所微生物实验室建设问题基本原则防止微生物污染事件的发生（包括对环境、实验人员、试验样品等的）。有利于试验操作的进行山东省药品检验所USP对于实验室布局和运作的规定LayoutofthelabshouldenhanceoperationsPreventcorss-contaminationSeparationofactivitiesPromoteSaftyLabareashouldhaveseparate“clean”and“liveculture”areaspoints,barr

3、iersWhenasamplehasgrowth,allfurtherworkinthe“liveculture”areaSamplingshouldtakeplacecarefullyasepticconditionsEMequipmentshouldbeloadedenviromenttobesampled,andcarefullyhandledIsolatortechnologymaybeuseful山东省药品检验所微生物实验室可单独建设也可共用普通建筑，但应自成一区，单独设立一层，或一层楼的一端。与建筑物其它

4、区域相通的部分应有门相隔。可按四区域划分：核心实验区、缓冲辅助区、PII级生物安全区、一般实验及准备区。核心实验区可按具体工作需要划分为数个试验单元，核心区各实验单元最好独立运行，核心区与PII级生物安全区不得共用一套换风系统，严格控制交叉污染的发生。各房间应功能明确，不得混用。药品检验、食品检验、化妆品检验等不得共用无菌室和缓冲间，防止交叉污染。准备室、洁净室、培养室等布局，应方便物品的传送，设置可以互锁的洁净双扉传递窗，坚决避免直接的空气交换防止交叉污染。微生物实验室房门应尽量实现自动关闭，缓冲区门为互锁。同一区

5、域内各实验单元房门应朝向同一方向或交错布局，防止直接的空气交换。山东省药品检验所微生物实验室的环境监控保证微生物实验室安全、有效运行对实验结果的可靠性做出有力支持微生物实验室建成后，必须配备相应的环境监控设备：浮游菌采集器、尘埃粒子计数器、风速仪、压差计、照度计和噪声计等等，对于微生物实验室环境保持，以定期监控为主要手段。过多的消毒、熏蒸会对无菌室的通风系统管路和试验仪器造成一定的腐蚀，影响使用寿命，不合理的擦拭反而可能会增加无菌室污染的机会，同一种消毒剂的反复使用可能会使微生物对消毒剂的耐受力增强。因此，应根据监测

6、情况制定相应的清洁计划。山东省药品检验所微生物实验室的环境监控——环境菌库的建立方法定期采集洁净室沉降菌及浮游菌，采用适宜的方法对搜集到的菌株进行鉴定，包括形态观察、生化鉴定、遗传信息分析（16sRNA测序、DNA脉冲场电泳分析等）、傅里叶红外光谱分析等，对每一株菌建立详细档案。目的1.分析无菌室环境菌种类、数量、分布随时间的变化关系，制定相应的消毒计划和工作计划。2.判断药品检出微生物是否是环境相关菌，是否与本实验室环境菌相关。山东省药品检验所企业生产区域环境菌库的建立当企业产品的灭菌条件和产品稳定性之间产生矛盾时

7、，该如何处理？山东省药品检验所解决方案：建立生产过程中关键区域的微生物监控体系，通过长期监控，找出关键区域常见抗性菌株，并据此建立新的灭菌条件。否则，如果环境中监测到更强的耐热菌株，则应立刻停止生产，进行彻底消毒。此外建立环境微生物库和实时监控体系，根据环境微生物的变化规律制定相应防范措施和消毒计划，并可对阳性产品污染环节进行排查堵漏。山东省药品检验所FTIR法用于药品检出菌与环境菌关联性分析定期（月）环境菌采集FTIR图谱测定图谱累积汇总总体环境菌谱库当月环境菌谱库药品微生物检查FTIR图谱测定D≤0.04D＞0.

8、04非环境菌疑为内源性环境菌外源性环境菌D≤0.04D＞0.04环境菌山东省药品检验所将27株药物分离菌平均光谱分别代入谱库分析，11株Hit值＜0.04，占40.7%，怀疑与环境菌相关。其中7株分离自六味地黄丸，检出时间：06年9月。带入当月谱库分析：5株Hit值＜0.04，而当月正处于无菌室改造未完成时，所以存在本实验环境污染的可能性。其中