微生物发酵工程实验

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1、微生物发酵工程实验何琳燕2010-11实验内容实验一机械搅拌发酵系统结构与控制系统实验二中试搅拌发酵罐的使用与维护实验三培养基的分批灭菌实验四磷细菌高密度发酵实验五喷雾干燥时间安排11月8、9、12日下午，熟悉发酵罐系统。11月15日周一，单因子实验，优化磷细菌发酵培养基的碳源。11月16日周二下午，单因子实验，优化磷细菌发酵培养基的碳源。（完成系列稀释、涂布，发酵液还原糖测定）发酵罐开盖，清洗。磷细菌种子制备11月17日周三上午，发酵系统启动，pH电极标定，溶氧电极标定，发酵培养基配制、装罐。周三下午，培养基分批灭菌。灭菌培养基取样、无菌检查。周三晚上，种子无杂菌

2、检查。接种，上罐，发酵控制，接种后取样测定（细菌数量、pH、还原糖等）。周三晚上，夜班，关注发酵控制参数，周四上午，取样测定（细菌数量、pH、还原糖、杂菌率等）周四下午，取样测定（细菌数量、pH、还原糖、杂菌率等）周五上午，放罐，清洗发酵罐；计数摇瓶实验结果周五下午，喷雾干燥。优化磷细菌发酵培养基的碳源（单因子实验）菌种：无机磷细菌培养基发酵培养基A：可溶性淀粉0.6%，硫酸铵0.5%，硫酸镁0.06%，磷酸氢二钾0.1%，酵母粉0.05%，pH7.0-7.5发酵培养基B：葡萄糖0.2%，可溶性淀粉0.4%，硫酸铵0.5%，硫酸镁0.06%，磷酸氢二钾0.1%，酵母

3、粉0.05%，pH7.0-7.5发酵培养基C：葡萄糖1%，硫酸铵0.5%，硫酸镁0.06%，磷酸氢二钾0.1%，酵母粉0.05%，pH7.0-7.5发酵培养基D：葡萄糖1%，玉米粉0.6%，硫酸镁0.06%，磷酸氢二钾0.1%，酵母粉0.05%，pH7.0-7.5无机磷培养基：葡萄糖1%，(NH4)2SO40.5%，NaCl0.03%，KCl0.03%，FeSO4·7H2O0.003%，MnSO4·4H2O0.003%，Ca3(PO4)21%，琼脂2%，pH7.0-7.5实验步骤配制培养基，分装于150或250mL三角瓶，包扎后，115℃灭菌20min。发酵培养基A

4、/B/C/D各3瓶。接种，接种量1%。培养，28℃、150rpm培养18-24h.测定细胞数量，取发酵液1mL系列稀释，取0.1mL菌液涂布无机磷培养基，28℃恒温培养3d后计数。灭菌培养基无菌度测定（1）显微镜观察法利用刚果红染色法可以在显微镜下快速区别死活菌。原理：活菌具有排斥染液的能力，而死菌失去了排斥染液的能力，因此，无色透明的是活菌，死菌为蓝色或浅蓝色。方法：将待测稀释液与一滴刚果红染色液很薄的均匀涂在载玻片上，风干后滴盐酸1-2滴，涂片变蓝，风干后在高倍镜或油镜下观察。刚果红溶液：称取刚果红0.1-0.2g，溶于10mL水中。盐酸酒精溶液：95%酒精1-

5、2mL，蒸馏水10mL，再加入浓盐酸0.25-0.3mL混合即成。（2）平板培养法可取出少量灭过菌的培养基置于37℃恒温培养箱中培养24h，若无菌生长，即视为灭菌彻底。磷细菌高密度发酵菌种：无机磷细菌培养基种子培养基见讲义第7页发酵培养基A无机磷培养基见讲义第7页LB培养基见讲义第7页种子制备配制种子培养基，分装100mL/500mL三角瓶，包扎，115℃灭菌20min，接种，28℃、150rpm培养18-24h问题：用于接种发酵罐，接种量5%，请问7L培养基需要多少菌种用量？种子接入发酵罐种子质量检查（包括哪些项目？分别用什么方法？）接种前还需要做什么？火圈接种法

6、接种后需要做什么？发酵参数调试稳定，如温度控制系统，空气流速，罐压，pH等。培养基灭菌质量检查发酵控制pH泡沫菌体浓度和形态还原糖发酵终点