基质细胞衍生因子在哮喘小鼠气道中的表达

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1、基质细胞衍生因子在哮喘小鼠气道中的表达：黄芸，欧阳海峰，彭晓丹，王文雅，吴昌归【摘要】目的观察基质细胞衍生因子-1(stromal-derivedfactor-1,SDF-1)在鸡卵清蛋白(OVA)诱导小鼠哮喘模型中的表达，探索哮喘气道重塑的发生机制。方法40只雌性SPF级C57BL/6小鼠，体重18～22g，随机分为哮喘组和对照组。按照文献方法建立OVA小鼠哮喘模型。两组动物于末次雾化结束后24h处死，取肺组织行病理切片，苏木精-伊红染色(HE)观察肺脏的组织病理学变化;逆转录聚合酶链式反应(RT-

2、PCR)、免疫印迹法(ethodsFortyfemaleC57BL/6miceofSPFgradelydividedintoasthmagroupandcontrolgroupintoestablishtheasthmaticmodel.Allthemicebeddedsectionsoflungtissuesatoxylinandeosin(HE)foranalyzingpathologicalchanges.SDF-1mRNAextractedfromlungtissueslungtissuesm

3、unohistochemistry(IH).Results①Afterrepeatedallergenchallenge,obviousinfiltrationofinflammatorycellsandproliferationofgobletcellsandsmoothmusclesappearedinmousebronchi.②AccordingtoRT-PCRandountofSDF-1issecretedinthelungtissuesinasthmaticmice,aybeoneofthe

4、criticalfactorsinasthmaticairodeling.　　KEYal-derivedfactor-1;asthma;airodeling　　支气管哮喘是一种慢性气道炎症，伴有气道高反应性和气道重塑，而气道重塑则是一个在慢性炎症基础上的异常损伤修复过程。基质细胞衍生因子-1(stromal-derivedfactor-1,SDF-1)是由基质细胞产生的一种CXC型趋化因子。近年来研究表明，基质细胞衍生因子对组织或器官的创伤、炎症损伤修复起到了重要的作用。但是，SDF-1与哮喘相关性的

5、研究目前还未见报道，我们就此进行了探讨。　　1材料与方法　　1.1药品与试剂鸡卵清蛋白(OVA)Ⅴ级(美国GBICO公司);氢氧化铝干粉(郑州派尼化学试剂公司);PBS(美国GBICO公司);SDF-1兔抗小鼠一抗(武汉博士德生物有限公司);过氧化物酶标记羊抗兔二抗(美国DAKO公司);ECL发光液(北京碧云天公司);兔抗小鼠内参β-actin(北京博奥森公司);免疫组织化学试剂盒(美国DAKO公司)。　　1.2方法　　1.2.1哮喘模型的制备小鼠哮喘模型实验参考文献[1]，略有变动。实验动物为40只

6、雌性SPF级C57BL/6小鼠(第四军医大学动物中心提供)，体重18～22g，随机分为哮喘组和对照组。按照文献方法[1]构建哮喘模型：0、7、14d于小鼠腹腔内注射致敏液0.2mL/只(致敏液为每0.2mLPBS溶液内含10μgOVA、20μg氢氧化铝)。于第21天开始0.5g/L浓度的OVA生理盐水溶液雾化，每次30min，隔日1次，共计18次。对照组用空白PBS及生理盐水，余同模型组。两组动物于雾化结束后24h处死，取右肺于40g/L甲醛溶液中固定，石蜡包埋，用于病理观察及免疫组织化学(IH)检测

7、;取左肺于液氮中保存，用于RT-PCR及in，30个循环。RT-PCR产物以10g/L琼脂糖凝胶电泳，电泳结果在GDS-8000数码成像及分析系统上观察、拍照。　　1.2.4免疫组织化学法检测SDF-1的表达哮喘组及对照组肺组织蜡块连续石蜡切片，经脱蜡至水后以0.3mL/L过氧化氢溶液浸泡10min，灭活内源性过氧化物酶;抗原热修复后以正常山羊血清封闭，分别加一抗即兔抗小鼠SDF-1抗体1∶200，4℃过夜;加生物素标记的二抗(羊抗兔IgG1∶200)，37℃，40min;加新鲜配制的二氨基联苯胺(D

8、AB)显色，苏木精复染细胞核，显微镜下观察5～10min，棕黄色染色为阳性信号。　　1.3统计学分析应用SPSS16.0软件包行统计学分析。实验数据以均数±标准差表示，采用两样本t检验处理统计学数据，P<0.05为差异具有统计学意义。　　2结果　　2.1小鼠的一般情况及肺组织病理学改变哮喘组小鼠经激发后，出现烦躁不安，呼吸急促，腹部翕动，易激惹;对照组小鼠行动敏捷，一般情况未见异常。哮喘组小鼠肺组织切片HE染色可见，小鼠细支气管周围和血管周围有大量