口蹄疫病毒O型抗体快速检测方法 镧系荧光免疫层析法

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1、1ICS 11.220B41     DB21辽宁省地方标准DBXX/XXXXX—XXXX     口蹄疫病毒O型抗体快速检测方法镧系荧光免疫层析法TheRapidDetectionMethodsforAntibodiestoFootandMouthDiseaseVirusTypeOLanthanideFluorescenceImmunochromatographicAssay点击此处添加与国际标准一致性程度的标识（本稿完成日期：2018年8月）XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施辽宁省质量技术监督局   发布4DBXX/XXXXX—

2、XXXX目  次前言II1　范围12　规范性引用文件13　原理14　仪器与试剂14.1　仪器14.2　试剂15　样品采集与处理25.1　样品的采集25.2　样品的处理25.3　样品的贮存26　检测方法26.1　样品稀释26.2　加样26.3　检测26.4　有效性判定27　结果判定2附录A（规范性附录）　样品稀释液的配置44DBXX/XXXXX—XXXX前  言本标准按照GB/T1.1给出的规则起草。本标准由辽宁省畜牧兽医局提出。本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。本标准起草单位：辽宁省动物医学研究院、辽宁省动物疫病预防控制中心。本标准主要起草人：顾贵波

3、、杨本勇、申贯男、李井春、关淼、王宏燕、王竹、杨国丽。4DBXX/XXXXX—XXXX口蹄疫病毒O型抗体快速检测方法镧系荧光免疫层析法1　范围本标准规定了以镧系荧光免疫层析法检测牛、羊、猪血清中的口蹄疫病毒O型抗体的检测方法。本标准适用于牛、羊、猪血清中口蹄疫病毒O型抗体水平的快速检测。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技

4、术规范3　原理采用免疫夹心法和镧系荧光免疫层析法相结合技术，检测动物血清样本中的口蹄疫病毒O型抗体。将镧系纳米荧光微球作荧光示踪物标记口蹄疫病毒O型重组抗原，血清样本抗体与镧系纳米荧光微球标记的口蹄疫病毒O型重组抗原接触形成复合物后，继续与硝酸纤维素膜上检测线包被的口蹄疫病毒O型重组抗原发生反应，形成抗原-抗体-荧光微球标记抗原免疫复合物，最后用荧光检测仪读取检测卡上的荧光信号。4　仪器与试剂4.1　仪器4.1.1　镧系荧光检测仪：激发波长为400nm±20nm，检测波长为615nm±10nm。4.1.2　单道可调移液器：10μL～100μL，0

5、.5μL～10μL。4.1.3　分析天平：感量0.0001g。4.1.4　离心机。4.1.5　冰箱：2℃～8℃，-20℃。4.2　试剂4.2.1　样品稀释液：见附录A。4.2.2　4DBXX/XXXXX—XXXX口蹄疫病毒O型抗体荧光免疫试剂卡：镧系荧光微球标记的口蹄疫病毒O型重组抗原和鸡IgY埋置在标记物垫内；硝酸纤维膜上的测试线（T）和参考线（C）分别包被口蹄疫病毒O型重组抗原和羊抗鸡IgY的IgG。（见图1）图1　口蹄疫病毒O型抗体镧系荧光免疫层析卡示意图1　样品采集与处理1.1　样品的采集应按照NY/T541中的规定进行，并做好安全防护。

6、按常规方法用干燥、洁净的离心管或适当容器采集3mL～5mL血液。1.2　样品的处理血液样本用离心机3000r/min离心3min，分离血清，血清量不少于500μL。1.3　样品的贮存血清样本在2℃～8℃冷藏可保存24h，如需长期保存应置-20℃或-80℃。2　检测方法2.1　样品稀释将待检血清样本用样品稀释液进行50倍稀释。2.2　加样将镧系荧光免疫层析卡置于干净平坦的台面上，用移液器吸取已稀释好的待检样本垂直滴加80μL于加样孔内。2.3　检测避光层析15min～20min，30min内用镧系荧光检测仪检测，读取效价。2.4　有效性判定控制线（

7、C线）检测到荧光信号，实验结果有效。3　结果判定4DBXX/XXXXX—XXXX效价≥128时，判为阳性；效价＜64时，判为阴性；效价在64～128之间时，判为可疑。_________________________________4DBXX/XXXXX—XXXXAA附　录　A（规范性附录）样品稀释液的配置A.1称取Na2HPO4·12H2O4.02gA.2称取NaH2PO4·2H2O0.66gA.3称取NAN31.5gA.4称取硫酸葡聚糖（MW:40000）1.5gA.5量取Tween-201L3.75mLA.6800mL双蒸水放入1L烧杯。A

8、.7A.1、A.2、A.3同时放入A.6烧杯中搅拌溶化。A.8A.4加入A.7烧杯中混匀。A.9A.5加入A.8烧杯中混匀。A.10用双