细菌金属β-内酰胺酶检测方法的评价

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1、细菌金属β?内酰胺酶检测方法的评价孟素慧，刘丽文，翁亚贤【摘要】目的比较用EDTA.Na2和2?巯基乙醇为酶抑制剂的协同过筛法来检测细菌金属酶的敏感性，为临床筛选金属酶，探究细菌的耐药机制提供依据。方法以EDTA.Na2和2?巯基乙醇为酶抑制剂，头孢他啶（CAZ）头孢噻肟（CTX）和亚胺培南（IPM）为底物在M?H平板上用纸片扩散法进行抗生素协同敏感性检测。结果对28株对IPM或三代头孢耐药的已知产金属酶的菌株进行以上两种方法的检测，应用2?巯基乙醇筛选法检出的金属酶阳性率78.6%(22/28)；应用E

2、DTA筛选法检出金属酶阳性率57.1%(16/28)；两种方法共同使用检出阳性率92.9%(26/28)。结论两种方法无显著性差异(χ2=1.75＜χ20.05（1）=3.84，P>0.05)，且两种酶抑制剂共同应用对金属酶的检出率更高。【关键词】金属β?内酰胺酶；协同过筛法；酶抑制剂　　EvaluationtotheMethodsofDetectingBacteriumMetallo?beta?lactamase　　Abstract：ObjectiveToparethesensitivityoft

3、ethods,inercaptoethanoleinhibitorsfordetectingmetallo?beta?lactamase,andtoscreenmetallo?beta?lactamasesoastostudythedrugresistantmechanism.MethodsTheenzymeinhibitorsercaptoethanolandthesubstratese,cefotaximeandimipenem.Themicrobiologicalsensitivitysynergi

4、ctestsethodintheMHagar.ResultsAmongthe28strainsofmetallo?beta?lactamaseproducingbacteria,thepositivesrainsaccountedfor57.1%(16/28)byEDTAmethod,78.6%(22/28)by2?mercaptoethanolmethod,and92.9%(26/28)synchronouslybythetethods.ConclusionItisconcludedthattherei

5、snosignificantdifferencebetethods,andthattheseteinhibitorsareusedatthesametimecanincreasethepositiverateofmetallo-beta-lactamasedetection.　　Keyetallo?beta?lactamase;sensitivitysynergicmethod;enzymeinhibito　　亚胺培南（imipenem，IPM）为碳青霉烯类抗生素，有极强的抗菌活性，8mg/L的IPM可抑

6、制98%以上的临床主要致病菌，特别适用于治疗严重的医院感染和免疫缺陷患者，但随着IPM的广泛使用，抗药株在逐年增加。细菌产生的β?内酰胺酶大部分系活性部位带丝氨酸残基的酶类，也有一小部分是活性部位为金属离子的酶类，称为金属β?内酰胺酶（metallo?β?lactamase），简称为金属酶。金属酶是一类对β?内酰胺类抗生素有着广泛水解作用的酶类，对所有抗生素，包括青霉素类、头孢菌素类（一、二、三代）和碳青霉烯类等均产生耐药，给临床治疗带来很大困难。因此金属酶的研究越来越受到重视，对该酶的检测可以进一步探究

7、细菌对多种抗生素耐药的机制。国内外已有较多关于金属酶检测方法的报道[5~7]，我们选用了两种简便易行、可在临床细菌室广泛使用的方法。基于金属酶的活性基团依赖于金属离子的特性[3]，选用两种金属离子的螯合剂EDTA.Na2和2?巯基乙醇破坏其活性基团，并结合三种抗生素（CAZ，CTX，IPM）观察协同抑菌现象，对两法的结果进行分析，现将结果报告如下。　　1材料与方法　　1?1材料　　1.1?1试剂与材料　　直径6mm厚1mm的空白纸片（自制）、M?H营养琼脂干粉（生物梅里埃公司）、分析纯EDTA.Na2（沈

8、阳试剂厂）、2?巯基乙醇、亚胺培南（IPM10μg/片，英国oxoid公司）、头孢噻肟（CTX30μg/片）、头孢他啶（CAZ30μg/片，北京天坛制药厂）。　　1?1?2菌株来源　　辽宁省人民医院细菌室提供IPM耐药的产金属酶的菌株28株，其中铜绿假单胞菌10株（1~10号）、芳香黄杆菌1株（11号）、嗜麦芽窄食单胞菌17株（12~28号）。　　1?2方法　　1?2?1EDTA.Na2纸片的制备　　精确称量0.8406g，分