免疫检测技术ppt课件

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1、第九章免疫检测技术免疫检测是目前生物学检测方法中用途最广泛的一种方法。具有高度精确、灵敏、特异的特点。可用于免疫学的基础理论和应用研究，也可应用于生物学研究的各个领域。1、免疫疾病诊断2、动物植物生理活动研究（激素、维生素）3、物种及微生物鉴定4、动物、植物性状的免疫标记5、免疫增强药物和疫苗的研究6、发病机理研究7、分子生物学研究免疫检测技术在生物科学领域中的应用：第一节抗原抗体反应原理抗体能特异性地识别相应的抗原，并与之结合。这种结合在体外也能发生，当抗原和抗体在体外特异性结合后可出现肉眼可见或借助仪器可检测出的反应现象

2、。试验时既可用已知抗体检测标本中有无相应抗原，也可用已知抗原检测标本中有无相应抗体。这种特性就是许多免疫检测方法的基础!!一、体外抗原抗体反应的特点①特异性：抗原抗体反应具有高度的特异性。②可逆性：抗原抗体反应所形成的复合物较稳定，但在一定条件下可解离。（低酸、高盐）③比例性：抗原抗体的比例合适，才可出现可见的反应现象。（网格理论）④阶段性：特异性结合阶段和可见反应阶段。网格理论——解释抗原抗体形成沉淀的机制三、抗原抗体反应类型1.沉淀反应2.凝集反应3.补体参与的反应4.中和反应5.免疫标记技术第二节常见免疫检测方法可溶性

3、抗原（血清蛋白、病毒抗原、细胞裂解液或组织液等）与相应抗体结合，在一定条件下形成肉眼可见的沉淀物称沉淀反应。一、免疫沉淀反应一、免疫沉淀反应1.液相沉淀反应2.凝胶扩散沉淀3.凝胶免疫电泳絮状沉淀环状沉淀免疫浊度沉淀单向琼脂扩散试验双向琼脂扩散试验血清免疫电泳火箭电泳对流免疫电泳免疫印迹等絮状沉淀试验操作步骤：（1）将可溶性抗原作一系列倍比稀释。（2）各管加入一定浓度的适量抗血清。（3）振摇使抗原、抗体充分混匀，置37℃孵育。（4）产生沉淀量随抗原量而不同，以出现沉淀物最多的管为最适比例管。絮状沉淀试验方法简单，设备要求低，

4、敏感度较低，目前多用以测定抗原抗体反应的最适比。环状沉淀试验操作步骤：（1）用毛细滴管吸取抗血清加于沉淀管（5×50mm）底部，避免产生气泡。（已知！）（2）将抗原溶液沿管壁缓缓叠加于抗血清液面上，形成清晰的交界面。（待测！）（3）置沉淀管于室温下使其反应，1~5min内在两界面间呈现乳白色沉淀环为阳性。30min仍无沉淀环出现则为阴性。应用：主要用于抗原的定性试验。用已知抗体来检测未知抗原。（诊断炭疽的Ascoli实验、细菌分型、血迹鉴定）。2.凝胶扩散沉淀凝胶扩散沉淀是指抗原与抗体在凝胶介质中自由扩散形成浓度梯度，抗原与

5、抗体在比例合适的扩散部位相遇形成沉淀线的反应。常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙稀酰胺凝胶等。最常用的方法为：①单向琼脂扩散试验②双向琼脂扩散试验单向琼脂扩散试验原理：将适当浓度的抗体混入琼脂凝胶中，琼脂凝固后，打成小孔，加入待测的抗原物质，使抗原在凝胶中由小孔自由向周围扩散，并在小孔周围合适的位置与抗体结合形成沉淀环，沉淀环的大小与抗原浓度呈正相关。单向免疫扩散试验示意图双向免疫扩散试验双向免疫扩散试验是在琼脂板上按一定距离打数个小孔，在相邻的两孔内分别放入抗原和抗体材料。当抗原和抗体向四周凝胶中扩散，在两孔间可出现2

6、～3条沉淀线，本法常用于抗原或抗体的定性或定量检测，或用于两种抗原材料的抗原相关性分析。3.免疫电泳技术免疫电泳技术是电泳分析与沉淀反应的结合产物。这种技术有两大优点：一是加快了沉淀反应的速度，二是将某些蛋白组分利用其带电荷的不同而将其分开，再分别与抗体反应，以此作更细微的分析。免疫电泳包括:血清免疫电泳、对流免疫电泳、火箭电泳、免疫印迹等血清免疫电泳将抗原混合物（病人血清）在凝胶中用电泳分离后，沿电泳方向挖一平行的小槽，加入抗血清，进行双向扩散。沉淀线的特点显示病人血清与正常人血清存在的差异，即血清蛋白组分的缺少或增加。免

7、疫电泳原理图解火箭免疫电泳火箭免疫电泳技术又称作单向电泳扩散免疫沉淀试验，它是由单向扩散发展起来的一项定量技术，实质上是加速度的单向扩散。沉淀线的高度与抗原量成正比火箭电泳图二、凝集反应（Agglutination）颗粒性抗原（如细菌、细胞）与相应抗体，在适当电解质存在的条件下，经过一定时间后出现肉眼可见凝集块称为凝集反应。1、直接凝集：将细菌或红细胞与相应的抗体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法和试管法。2、间接凝集：将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出现颗粒凝集现象。妊娠免疫诊断试验

8、孕妇尿中，绒毛膜促性腺激素（HCG）含量明显增高。（HCG是可溶性抗原）反之，非孕妇尿中HCG含量甚微，不足以消耗掉抗HCG抗体。三、补体结合实验（2个系统，5种成分）已知抗原加入血清（检测抗体）加入标准量补体加入包被抗体的红细胞检测红细胞溶解情况AgPatient’sserumAbNoA