常规免疫检测技术.doc

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1、常规免疫检测技术(%1)皮内试验(intmderrpmaltest,ID)宿主在病原体刺激后，体内产生亲细胞性抗体(IgE和IgG4)o当其与相应抗原结合后，肥人细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒，释放生物活性物质，引起注射抗原的局部皮肽出现皮丘及红晕，以此便可判断体内是否某有种特异性抗体存在。(%1)免疫扩散(irmnunodiffusion)和免疫电泳(immunoelectrophoresis)1.免疫扩散于一定条件下，抗原与抗体在琼脂凝胶中相遇，在二者含暈比例合适时形成肉眼可见的门色沉淀。木法有两种类型：①单相免疫扩散：将一•定量的抗体混入琼脂凝胶屮，使抗原溶液在凝胶小扩散而形成沉

2、淀坏，其人小与抗原量成正比；②双相免疫扩散：将抗原与抗体分别置于凝胶板的相对位置，二者可自由扩散并在小间形成沉淀线。用双相免疫扩散法既可用已知抗原检测未知抗体，也可用已知抗体检测未知抗原。2.免疫电泳是将免疫扩散与蛋门质凝胶电泳相结合的一项技术。事先将抗原在凝胶板中电泳，之后在凝胶槽屮加入相应抗体，抗原和抗体双相扩散后，在比例合适的位置，产生肉眼可见的弧形沉淀线。(%1)间接红细胞凝集试验(indirecthaemagglutinationtest,IHA)以红细胞作为可溶性抗原的载体并使之致敏。致敏的红细胞与特异性抗体结合而产生凝集，抗原与抗体间的特异性反应即由此而显现。常用的

3、红细胞为绵羊或0型人红细胞。(%1)间接荧光抗体试验(indirectfluorescentantibodymethod,IFA)wv法用荧光素(异硫氛基荧光素)标记第二抗体，可以进行多种特异性抗原抗体反应，即可检测抗原又可检测抗体。木法具有较高的敏感性、特异性和重现性等优点，除可用于寄生虫病的快速诊断，流行病学调查和疫情监测外，还可用于组织切片屮抗原定位以及在细胞和亚细胞水平观察和鉴定抗原、抗体和免疫复合物。(:li)对流免疫电流试验(counter-iinmunoelectrophoresis,CIE)对流免疫电泳试验是以琼脂或琼脂糖凝胶为基质的-种快速，敏感的电泳技术。既可

4、用C知抗原检测抗体，又可用已知抗体检测抗原。反应结果可信度高，适用范围广。以木法为基础改进的技术有酶标记抗原对流免疫电泳(enzyme-linkedantigencounterimmunoelectrophoresis,ELACIE)和放射对流免疫电泳自显影(radio-immuno-counterelectrophoreticautography,RCIEPA)等技术。二者克服了电泳技术本身不够灵敏的弱点。(%1)酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)vvv酶联免疫吸附试验原理是将抗原或抗体与底物(酶)结合，使其保持免疫反

5、应和酶的活性。把标记的抗原或抗体与包被于固相载体上的配体结合，再使之与相应的无色底物作用而显示颜色，根据显色深浅程度H测或用酶标仪测定0D值判定结果。(%1)免疫酶染色试验(inmiunoenzymestainingtest,IEST)免疫酶染色试验以含寄生虫病原的组织切片、印片或培养物涂片为固相抗原，当其与待测标木屮的特异性抗体结合后，可再与酶标记的第二抗体反应形成酶标记免疫复合物，后者可与酶的相应底物作用而出现肉眼或光镜下可见的呈色反应。(%1)免疫卬迹试验(iiirniunoblotingtechnique,ELIB)免疫卬迹试验又称免疫卬渍或westernblot,是由十

6、二烷基硫酸钠-聚丙烯酸胺凝胶电泳(SDS-PAGE),电转印及固相酶免疫试验三项技术结合为一体的一•种特殊的分析检测技术。木法具有高度敏感性和特异性。关于ELISA酶免疫测定(enzymeimmunoassay)可分为均相(homogenous)和非均相(heterogenous)两种类型。在均相EIA屮可不需进行游离的和结合的标记物的分离而直接测定标记物。例如在某种条件下，抗原抗体反应后形成的酶标记抗原抗体复合物屮的酶失去其对底物作用的活力，因而测岀的酶活力玄接反映游离的酶标记物。均相EIA在临床检验屮较少应用。非均相EIA需先进行•游离的和结合的标记物的分离。如前所述，固相载

7、体可用作一种分离手段。这种固相酶免疫测定方法在1971年最初建立时称为酶联免疫吸附剂测定(enzymelinkedimmunosorbentassay),简称ELISA,在国内有译作酶联免疫吸附试验或酶标，已习用。ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标木(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表血的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固