乙型肝炎患者外周血单个核细胞中hbv

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1、乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV：张平，曹宁芬，袁迎春，张栩，李玉芳，焦运，【摘要】：目的研究HBV感染者血清及外周血单个核细胞（PBMC）中HBV-DNA的感染情况。方法采用荧光定量PCR技术对112例乙肝患者PBMC及血清中HBV-DNA的感染情况进行检测。结果PBMC内HBV-DNA阳性60例，阴性52例；PBMC内HBV-DNA阳性患者HBeAg阳性率68.3%，较PBMC内HBV-DNA阴性患者显著增高（P＜0.05）；血清和PBMC检测结果一致的患者占总检出率的79.5%。肝硬化组P

2、BMC内HBV-DNA阳性率高于急性乙型肝炎组和慢性肝炎组（P＜0.05）。结论血清与PBMC内HBV-DNA阳性率以及HBeAg阳性率存在明显的相关性。PBMC中HBV-DNA的持续存在可能与乙肝易慢性化有关。【关键词】乙肝病毒；肝硬化；HBV-DNA；外周血单个核细胞　　Abstract：ObjectiveToexploretherelationshipbetandPeripheralBlood.MononuclearCells(PBMC)inHBVpatients.MethodsHBVinfe

3、ctioninserumandPBMCeresultinboth.serumandPBMCoccurredin79.5%ofallcases.PBMCinfectionrateinliver.sclerosispatientsongtheHBV-DNApositiveratesinserumandPBMCandthepositiverateofHBeAg.ThecontinuousexistenceofHBV-DNAinPBMCofHBVpatientsmayplayasignificantrole

4、inthediseasemechanism.　　Key）、净化公司超净工作台、北京医用离心机厂低速离心机、日本日立公司SANYO型低温冰箱、美国贝克曼自动生化分析仪。TagDNA聚合酶购自晶美生物制品公司，荧光定量试剂盒购自深圳达安基因公司。　　1．3外周血PBMC内HBV-DNA检测(单个核细胞HBV-DNA)　　无菌采集空腹静脉全血5mL放入含EDTA2Na抗凝试管中，常规Ficoll梯度离心法分离外周血单个核细胞。为排除血清污染、最后一次洗涤液留送PCR法检测HBV-DNA。离心10000r/

5、min，留取沉淀物，-20℃保存，PBMC沉淀和末次洗涤液分别加入50μLDNA提取液混匀，100℃沸水浴10min，转至4℃静置6～8h，离心5min，取上清液5μL做PCR反应。　　1.4血清HBV-DNA检测　　参照试剂盒说明书进行。直接吸取血清50μL，加等量的DNA提取液混匀，100℃沸水浴10min，转至4℃静置6～8h，离心5min，取上清液5μL做PCR反应。　　2结果　　2.1乙肝患者PBMC及血清中HBV-DNA的检测结果　　见表1。血清和PBMC检测结果一致的患者占79.5%（

6、89/112）。随着病情加重，由急性肝炎→慢性肝炎→肝硬化患者血清内HBV-DNA阴性而PBMC内HBV-DNA阳性所占的比例有上升趋势。表1各型乙肝患者血清中与PBMC中HBV-DNA检出情况(略)　　3讨论乙肝病毒是嗜肝性的、非肝细胞毒性病毒。HBV-DNA［2］存在于HBV感染肝细胞内，其次是外周血单个核细胞。本实验运用荧光定量PCR技术检测了各型乙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞中HBV-DNA的水平。表1所示各组乙肝患者其血清和PBMC中HBV-DNA检测一致的达79.5%，即PBMC和血

7、清中HBV-DNA变化呈一致性趋势，说明血清和PBMC中HBV-DNA阳性率有相关性，与有关报道一致［3］。随着病情加重（由急性肝炎→慢性肝炎→肝硬化）患者血清内HBV-DNA阴性而PBMC内HBV-DNA阳性所占的比例有上升趋势，肝硬化组达36.1%，这可能与HBV长期存在于PBMC和肝细胞中增加了HBV整合的机会有关。HBV-DNA可能是肝病患者发生肝硬化的高危因素［4］，故检测PBMC内HBV-DNA是对血清HBV-DNA的一个重要补充。　　一般认为血清HBV-DNA和HBeAg是病毒复制的指

8、标。HBeAg持续阳性表明存在HBV活动性复制。而部分患者由于HBV前C区基因变异，导致不能形成HBeAg。由表2所示112例乙型肝炎患者PBMC内HBV-DNA阳性60例、阴性52例，PBMC内HBV-DNA阳性患者HBeAg(+)阳性率68.3%，较PBMC内HBV-DNA阴性患者显著增高，说明血清HBeAg阳性可反映HBV在细胞内活跃性复制。但有学者［5］发现一些血清HBV标志物阴性的患者在其外周血PBMC中或肝组织中可检测到HBV-DNA，可能与上述变异有关。