滇南黄草乌内生真菌抗菌活性的筛选

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1、滇南黄草乌内生真菌抗菌活性的筛选：李治滢，杨丽源，李绍兰，陈有为，吴少华【摘要】　　目的从滇南黄草乌AconitumvilmorimianumKom.植物的根和茎中分离内生真菌，并进行初步鉴定和抗菌活性筛选。方法经显微形态观察进行内生真菌的分类鉴定，同时采用纸片法进行抗菌活性筛选。结果从滇南黄草乌植物中分离获得37株内生真菌，其中14株内生真菌有抗菌活性，占菌株数的37.84%；镰孢霉属（Fusarmm）是抗菌活性菌株的优势种属；青霉属（Penicinium）的抗菌活性高且抗菌谱广。结论滇南黄草乌植物内生真菌中广泛分布着有抗菌活性的菌株。【关键词】滇南黄草乌内生真菌抗菌活性　　Abstrac

2、t:ObjectiveToisolateandidentifysomeendophyticfungifromtherootandstemofAconitumvilmorimianumKom.plantanditsantibacterialactivitiesorphologicallyidentifiedanditsantibacterialactivitiestherootandstemofAxonitumvilmlrimianumKomplant，14trains(37.84%oftotalstrains)ofthemhadtheinhibitoryactiononmicroorgani

3、sm，andFusariumspeciesinantfamiliesamongantibacterialactivitiesstrains，Penicilliumspecieshadevidentinhibitoryactivity.ConclusionTherearemanyantibacterialstrainsinAconitumvilmorimianumKom.　　KeyvilmorimianumKom;Endophyticfungi;Antibacterialactivity　　黄草乌为毛莨科乌头属植物AconitumvilmorimianumKom，的干燥块根，俗称大草乌。野生滇

4、南黄草乌是植物卡氏乌头的侧生块根，别名藤乌、黄草乌、小草乌，属藤本耐寒植物［1］。黄草乌，云南素有大补药之称，是云南白药等名贵中成药的主要原料之一，有搜风、除湿、活血、止痛等功效。　　加强对乌头属植物的活性成分、药用价值的研究，以开发新的药用植物资源，从而缓解我国中药资源日益减少与药用植物资源需求量的不断增加之间突出矛盾。毛茛科是含有毒植物种类最多科之一，其中乌头属是我国最早记载的有毒植物〔2〕，在开发利用的同时必须采取正确的措施以降低其毒性。本研究的目的旨在为保护滇南黄草乌植物资源、开发新型抗菌药物、解决多年来困扰临床的乌头碱的毒性问题寻找新途径。　　1材料与方法　　1.1植物样品滇南黄草

5、乌AconitumvilmorimianumKom植物采自云南省会泽县大海乡中草药种植基地，海拔3150m。　　1.2指示菌本次实验所用的指示菌均由云南省微生物研究所真菌资源与菌种保藏室提供。所用指示菌参照国家新药筛选中心的植物内生菌抗菌筛选模型进行选取。　　金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus(G+)，藤黄八叠球菌sarcinalutea(G+)，大肠埃希氏杆菌Escherichiacoli(G-)，铜绿假单孢菌(绿脓杆菌)Pseudomonasaeruginosa(G-)。白假丝酵母(白色念株菌)Candidaalbicans，星形石膏样毛癣菌(须疱毛癣菌)Tricho

6、phytongypseumasteroides。　　1.3培养基PDA培养基(马铃薯葡萄糠培养基)，临用时每毫升培养基中加80单位的青霉素以抑制细菌生长；促孢培养基(KH2PO4，MgSO4·7H2O，KNO3，KCl，葡萄糖，蔗糖)；营养肉汤培养基（蛋白胨，牛肉膏，NaCl)；沙博弱氏培养基(葡萄糖，蛋白胨)。　　1.4内生真菌的分离首先用自来水冲洗净川乌植物的根、茎表面的泥沙，接着进行表面消毒［3]，在无菌条件下切成0.3cm×0.3cm大小的片段种植在PDA培养基里，置于(28±1)℃温箱中静止培养。培养3～12d后，在接种点周围可见有菌丝生长，挑取植物组织周围的菌丝转接入PDA试管斜

7、面，经纯化即得川乌植物内生真菌。　　　1.5内生真菌的分类鉴定采用插片培养方法，对分离获得的内生真菌进行显微形态特征的观察、分类鉴定。分类检索参照文献［4，5］。　　1.6内生真菌的抗菌活性筛选　　1.6.1内生真菌的发酵培养将分离获得的内生真菌分别接入PDA液体培养基中，于(28±2）℃，200r/min的摇床上振荡培养6d，加等体积的95%酒精浸提48h以上，过滤弃菌丝体浓缩浸提液，制成菌株的发酵样品备用