pten基因在原发性肝细胞癌中的表达

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1、PTEN基因在原发性肝细胞癌中的表达【摘要】目的探讨PTEN基因变异在原发性肝细胞癌(HCC)发生发展中的作用。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT?PCR)技术，对30例肝癌组织、30例癌旁组织和16例正常肝组织细胞中PTEN基因的表达情况进行了检测和分析。结果肝癌组织中PTEN基因表达水平明显低于癌旁组织和正常肝组织（F＝6.785，q=4.269、4.549，P<0.05）。低分化肝癌组织中PTEN基因表达水平显著低于高、中分化肝癌组织(t=3.266,P<0.01)。结论PTEN基因失活与肝癌发生密切相关；PTEN基因表达水平与HCC恶性程度有明显相关性

2、，提示其变异可以作为病人预后判断的指标。【关键词】基因PTENRNA信使癌肝细胞逆转录聚合酶链反应［ABSTRACT］ObjectiveTostudytheroleofPTENvariationinthepathogenesisofhepatocellularcarcinoma(HCC).MethodsSemi?quantitivereversetranscriptasepolymerasechainreaction(RT?PCR)allivertissuesservedascontrols.ResultsTheexpressionlevelofPTENgeneintheHC

3、Ctissuesallivertissues（F＝6.785;q=4.269,4.549;P<0.05）.Inlouchlooderately?differentiatedHCCtissues(t=3.266,P<0.01).ConclusionTheinactivationofPTENiscloselyassociateda,andtheexpressionofPTENishighlyrelatedalignancyofthecancer,essenger;carcinoma,livercell;reversetranscriptasepolymerasecha

4、inreaction原发性肝细胞癌(HCC)是一种高发性恶性肿瘤，其发生发展涉及多基因、多分子水平的改变。PTEN基因又称MMAC1或TEP1，是一个具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因。PTEN蛋白在细胞的生长发育、信号传导、迁移、凋亡过程中起到重要作用。PTEN基因的突变和失活存在于多种肿瘤中，如神经系统、生殖系统及消化系统肿瘤等。国外有学者研究发现，肝癌组织中存在着PTEN基因的突变［1］，国内学者用免疫组化方法检测了PTEN蛋白在肝癌中的表达，发现肝癌组织中存在较高比例的PTEN蛋白的阴性表达［2］。目前，有关PTEN的研究集中于基因的缺失和突变，而对于基因的表达则研究得

5、较少。本研究应用半定量RT?PCR技术从mRNA水平检测PTEN基因在肝癌、癌旁及正常肝组织中的表达情况，分析PTEN基因失活在肝癌发生中的作用。1材料与方法1.1材料标本来自2001年12月～2002年12月青岛大学医学院附属医院及青岛市市立医院肝胆外科手术病人。30例HCC病人（HCC组），男22例，女8例，年龄33～71岁，平均52岁。术中取癌区、癌旁区（距癌边缘2～5cm）组织标本。16例肝血管瘤手术病人为正常对照组（CON组），其中男11例，女5例，年龄35～59岁，平均52岁。术中取正常肝组织标本。所有标本均经病理学检查证实。1.2方法1.2.1组织总RNA提取及

6、RT?PCR检测PTEN表达用Trizol法提取组织总RNA，水溶后将其反转录合成cDNA。PTEN基因引物如下。外显子1：5′?CGAAGCTTCCACCATGACCATCATCAAAG?3′；外显子5：5′?ATCAAACCCTTTTGTGAAGA?3′；外显子8：5′?TCTATACTGCAAATGCTATC?3′；外显子9：5′?TTGGATCCTCAGACTTTTGTAATT?3′。分别以外显子1、5为上游引物，8、9为下游引物，进行1?8、1?9、5?8、5?9四种组合，用RT?PCR法检测PTEN基因不同片段在肝癌中的阳性表达率及表达水平。以甘油醛?3?磷酸脱氢

7、酶（GAPDH）作为内参照（上游引物5′?CTCAGACACCATGGGGAAGGTGA?3′；下游引物5′?ATGATCTTGAGGCTGTTGTCATA?3′）［3］。PCR反应体积为25μL，反应体系为10×Buffer2.5μL，MgCl21.5mmol/L，dNTP0.1mmol/L，TapDNA聚合酶1.0U，PTEN及GAPDH上下游引物各0.4μmol/L，cDNA模板2μL。PCR反应条件为94℃预变性3min；94℃45s，58℃45s，72℃1.5min，33个循环；72℃延伸10