枸杞多糖对地塞米松诱导的小鼠脾脏细胞凋亡的影响

《枸杞多糖对地塞米松诱导的小鼠脾脏细胞凋亡的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、枸杞多糖对地塞米松诱导的小鼠脾脏细胞凋亡的影响【摘要】目的探讨枸杞多糖（LBP）对地塞米松（DEX）诱导的小鼠脾脏细胞凋亡的影响。方法以水提取-乙醇沉淀法制备LBP，分别给予实验小鼠每天口服LBP25、50、100mg,10d后体外实验取小鼠脾脏细胞与10-5、10-6、10-7mol／L的DEX共同孵育，6h后检测细胞凋亡率；体内实验给予小鼠腹腔注射DEX（25mg/kg），10h后取脾脏细胞直接检测凋亡率。结果实验动物预先口服LPB10d后，可使DEX诱导的小鼠脾脏细胞凋亡率显著降低，并呈现量效关系。结论LPB的免疫

2、调节和促进作用与其对免疫细胞的保护、降低免疫细胞凋亡有关。【关键词】枸杞多糖;脾脏细胞;凋亡;小鼠　　Abstract:ObjectiveTostudytheeffectofpolysaccharidefromlyciumbarbarum(LBP)onspleencellapoptosisinducedethasoneinmice.MethodsTheKunmingmiceinistratedgLPBeverydayrespectivelyfor10days.ThenthemiceentandBgroupsforinvi

3、troexperiment).SpleencellsmiceingroupAethasoneatthedosesof10-5,10-6,and10-7mol／Lfor6hours,thentheratesofapoptosisethasoneatthedoseof25mg/kginmiceingroupB,spleencellsmediately.ResultsOraladministrationiceinducedethasonemunofunctionisrelatedtoitseffectsoflobarbaru

4、m;polysaccharide;spleencell;apoptosis　　细胞凋亡(apoptosis)又称程序性细胞死亡，是细胞生理性死亡的主要形式，在控制细胞增殖和分化、肿瘤的发生和生长等方面都起着重要的作用，也是机体免疫衰老过程中重要的分子机制之一。可以诱发细胞发生凋亡的因素很多，本研究以地塞米松与小鼠脾脏细胞共同孵育，诱发脾脏细胞凋亡为模型，探讨枸杞多糖（lyciumbarbariumpalysacharides,LBP）在体外和体内对大鼠脾脏细胞凋亡的影响，现报道如下。　　1材料与方法　　1.1材料与主要试

5、剂　　　　枸杞多糖（LBP）：宁夏枸杞，购自广州市药材公司，乙醇回流提取，LBP含量为48.6%,冷冻干燥备用。　　　　24孔平底细胞培养板：德国GrEiner公司。　　　　实验动物：健康成年昆明种小鼠,体质量18～22g，由中山大学实验动物中心提供，雌雄兼用,合格证号99A057。　　1.2方法　　1.2.1实验分组适应性喂养5d后将小鼠分为两组：A正常对照组：普通饲料喂养，每天胃饲生理盐水0.2mL；B枸杞多糖组：饲料同上，每天胃饲不同浓度的枸杞多糖0.2mL，枸杞多糖含量分别为25、50、100mg。连续喂养10d

6、后分再分体外实验和体内实验两部分进行。体外实验：脱颈椎处死小鼠，无菌操作取出脾脏，按常规制成脾脏细胞悬液，台盼蓝检查细胞活性，计数并调整细胞至1×107／mL，加入地塞米松并使其终浓度分别为10-5、10-6、10-7mol／L。每组均做双份，另设空白对照（不加DEX）。各取2mL细胞悬液置细胞培养孔，5％CO2、37℃孵育6h后，分别作形态学观察和流式细胞术检测细胞凋亡情况。体内实验：于小鼠腹腔注射地塞米松（25mg/kg），10h后取出小鼠脾脏，分离细胞并制成细胞悬液，直接进行检测。　　1.2.2形态学观察按常规方法

7、，4％甲醛室温下固定细胞10min，取一滴涂于预先用2％(V∶V)氨丙基三乙氧基硅烷(APES，Sigma公司)丙酮液处理的载玻片上，晾干后用苏木精伊红染色。　　1.2.3流式细胞术分析取已培养6h样本，按1∶3与70％乙醇混匀，置4℃过夜后用吖啶橙(AO)染色，流式细胞仪(美国Coulter公司)检测细胞变性DNA比例，机载软件处理后得出细胞凋亡率，每份样品检测细胞数>104。　　1.2.4统计学处理实验数据用±s表示，两组均数间比较用t检验，以P＜0.05为差异有显著性。　　2结果　　2.1地塞米松对离体小鼠脾

8、脏细胞的凋亡诱导作用　　体外实验中，与小鼠脾脏细胞共同孵育6h后，10-5、10-6、10-7mol／L的地塞米松均有诱发小鼠脾脏细胞脾脏细胞凋亡的作用，促进其DNA片段化，表现出明显的凋亡细胞特征。体内实验中，小鼠腹腔注射地塞米松（25mg/kg）10h后,表现出明显地诱发小鼠脾脏细胞脾脏细胞凋亡的作用，差异具有极