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《非病毒载体负载增强型绿色荧光蛋白转染永生化神经前体细胞》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、非病毒载体负载增强型绿色荧光蛋白转染永生化神经前体细胞作者：桂伶俐，刘志恒，张传汉，高峰【关键词】绿色荧光蛋白质类；,基因表达；,转染；,神经前体细胞 TransfectionofenhancedgreenfluorescentprotEinintoimmortalizedneuralprogenitorcellsbynonviralvectors 【Abstract】AIM:Toinvestigateaneffectivetransfectionmethodofnonviralvectorsandtheexp
2、ressionofenhancedgreenfluorescentprotEIn(EGFP)inthetransfectedimmortalizedneuralprogenitorcells(INPC).METHODS:TheplasmidEGFPC1ine2000,TRANSfectionandSofast.TheexpressionofEGFPandthetransfectionefficiencyofthe3vectorseasuredat24haftertransfection.Thetransfection
3、efficiencyofthevectorostefficient,inetheexpressionpeakofEGFP.Theviabilityoftransfectedandnontransfectedcellseasuredbytrypanbluerejectiontest.AftertheplasmidEGFPC1olecularmarkerofneuralprogenitorcells,nestin,munocytochemistry.AfterINPC/EGFPL/Lfetalbovineserum,th
4、ecellmorphologyandtheexpressionofEGFPine2000,TRANSfectionandSofastine2000ostefficient.Itstransfectionefficiencyat12,24,48and72haftertransfectionasandprocesses.CONCLUSION:ExtrinsicgenescanbeeffectivelytransfectedintoINPCbyLipofectamine2000.AndEGFPisoneofthevalua
5、bletrackingtoolsforINPC. 【Keyine2000，TRANSfection或阳离子聚合物Sofast分别负载质粒EGFPC1转染INPC，利用荧光显微镜检测转染后24h的转染效率.对转染效率最高的一种载体，观察其转染后12，24，48和72h转染效率，确定EGFP表达最高峰.用台盼蓝排斥试验检测转染和未转染细胞的活力.质粒EGFPC1转染INPC后，经G418筛选，挑选细胞克隆，命名为INPC/EGFP,观察其EGFP阳性率.应用巢蛋白抗体鉴定INPC/EGFP.50mL/L胎牛血清诱导IN
6、PC/EGFP分化，观察分化后细胞的形态及EGFP表达.结果:Lipofectamine2000，TRANSfection和Sofast转染INPC后24h，转染效率分别为(25.5±2.9)%，(4.0±1.7)%，(7.9±1.4)%.Lipofectamine2000的转染效率最高.其转染后12，24，48和72h的转染效率分别为(17.1±0.7)%，(25.5±2.9)%，(19.4±0.9)%，(15.6±1.4)%，EGFP在转染后24h表达最高.INPC/EGFP中，EGFP阳性率约为95%.INPC
7、/EGFP巢蛋白表达阳性，其分化后呈神经元或星形胶质细胞样，且胞体及突起中仍可见绿色荧光.结论:Lipofectamine2000可高效转染INPC.EGFP是INPC理想的示踪方法之一. 【关键词】绿色荧光蛋白质类；基因表达；转染；神经前体细胞 0 引言 永生化神经前体细胞（immortalizedneuralprogenitorcell,INPC）具有自我更新、无限增殖及多向分化的潜能，且较原代神经前体细胞易行基因操作，成为神经系统损伤细胞替代及基因治疗的理想靶细胞［1］.而选择高效的外源基因导入系统对基因
8、治疗的效果至关重要.尽管病毒介导的基因转染具有更佳的转染效率［2］，但由于其安全性和技术方面的原因,探讨高效率的非病毒载体基因转染方法更具意义.本实验拟以增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotEin,EGFP)为报告基因，采用不同种类阳离子脂质体或阳离子聚合物转染大鼠INPC,检测其转染效率，并观察EGFP
