tgfβ1 mrna在肺腺癌组织中的表达论文

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1、TGFβ1mRNA在肺腺癌组织中的表达论文【摘要】目的通过检测转化生长因子β1（TGFβ1）在肺腺癌中的表达水平，探讨其与肺腺癌分化程度、TNM分期及预后等的相关性。方法应用TaqMan探针，GAPDH为内参照，建立实时荧光定量PCR反应体系，对TGFβ1mRNA在肺腺癌中的表达进行检测。结果肺腺癌组织中TGFβ1mRNA表达水平显著高于癌周正常肺组织(t=10.46,P0.01),TGFβ1的表达与淋巴结转移及TNM分期有关（t=2.94、2.39,P0.01、0.05），并且随病人术后生存期的延长，TGFβ1表达水平有降低的趋势。结论TGFβ1mRNA高表达对肺腺癌的

2、进展及转移起促进作用，可作为判断肺腺癌病人预后的指标。【关键词】肺肿瘤受体转化生长因子β聚合酶链反应［ABSTRACT］ObjectiveTostudytheexpressionoftransforminggroaanditscorrelationordifferentiation,TNMstagingandprognosis.MethodsUsingTaqManprobeandinnercontrolGAPDHgene,afluorescentquantitativePCRreactionsystemRNAinthecancertissue.ResultsTheexpression

3、ofTGFβ1mRNAarkedlyhigherinthecancerthaninnormaltissue(t=10.46,P0.01)andshophnodemetastasis(t=2.94,P0.01)asRNAplaysapositiveroleintumorprogressionandmetastasis,eterforthedisease.［KEYan探针对TGFβ1在肺腺癌中的表达进行检测，探讨其与肺腺癌临床病理学特点的关系。1材料与方法1.1材料来源选用青岛大学医学院附属医院病理科1999～2001年经病理诊断为肺腺癌的手术切除肿瘤组织及癌旁肺组织标本62例，病人

4、术前均未经化学治疗或放射治疗，术后均随访5年以上。其中男27例，女35例；年龄38～73岁，平均54.9岁；淋巴结有转移者20例，淋巴结无转移者42例；TNM分期Ⅰ期41例，Ⅱ期11例，Ⅲ期10例；术后半年内死亡者15例，5年及以上生存者14例。1.2试剂和仪器TGFβ1、GAPDH引物及探针购自美国ABI公司的AssayondemandTaqManGeneExpressionAssays。实时荧光定量PCR仪ABIPRISM7700SequenceDetectionSystem购自美国PE公司。1.3方法1.3.1RNA提取及cDNA合成从癌组织及癌旁正常肺组织的冷冻组织块中

5、按RNA试剂盒说明书提取并鉴定RNA。取5μg经DNaseⅠ处理过的RNA以OligodT为引物进行逆转录。10μL体系中含有1×逆转录缓冲液，5mmoL/L的MgCl2,0.01moL/LDTT,40URNase抑制剂，50USuperScriptⅡRT，0.1mmolOligodT，5μgRNA。逆转录反应条件为：42℃50min,.freelin。将合成的cDNA储存于-20℃冰箱中，用于PCR反应。1.3.2实时PCR扩增25μL反应体系中有含有25ngRNA的cDNA模板，1×PCRTaqManUniversalMasterMix和1×TaqManGeneExpre

6、ssionAssayMix（均购自美国ABI公司）。PCR扩增反应条件：50℃2min、95℃2min，1个循环；95℃15s、60℃1min，40个循环。1.3.3结果分析cDNA量的标准化是通过看家基因GAPDH做内参照来完成的。每个PCR反应板中均包括来自正常肺组织的cDNA作为校对。定量分析采用相对定量法4。2结果2.1TGFβ1mRNA表达水平肺腺癌TGFβ1mRNA表达量（3.03±2.30）明显高于其相应的癌旁肺组织（1.12±2.42），两组比较差异有显著性（t=10.46,P0.01）。2.2TGFβ1表达与肺腺癌组织学分化程度及TNM分期的关系TGFβ1表

7、达水平与肺腺癌病人的性别、年龄、组织分化程度及肿瘤大小无关，淋巴结转移阳性组TGFβ1的表达明显高于淋巴结转移阴性组（t=2.94,P0.01）。随肿瘤TNM分期的增加，TGFβ1表达有增高的趋势，TNMⅠ期病例TGFβ1表达水平明显低于TNMⅠ期病例（t=2.39,P0.05）。见表1。2.3TGFβ1表达与肺腺癌病人预后的关系随病人生存期的缩短，TGFβ1表达有增加的趋势，其中半年内死亡组病人的TGFβ1表达最高，其次为生存介于半年至5年组