hfcl细胞诱导hl60细胞分化和改变其基因表达谱的研究

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1、HFCL细胞诱导HL60细胞分化和改变其基因表达谱的研究作者：梁蓉，黄高昇，陈协群，白庆咸，王哲，董宝侠，王文清，张伟平【摘要】　　本研究探索正常人骨髓成纤维细胞样基质细胞（HFCL）对急性髓系白血病HL60细胞增殖分化影响的分子机理。采用流式细胞仪检测细胞周期，NBT还原实验和CD11b、CD14、CD13、CD33细胞表面抗原的测定检测细胞的分化；应用基因芯片技术检测HL60细胞与HFCL细胞共培养前后基因表达谱的改变，并采用半定量RTPCR、Northernblot对芯片结果进一步

2、验证。结果发现，HL60细胞与HFCL细胞共培养后，G0/G1期细胞明显增多，S期细胞减少；NBT阳性细胞增高，CD11b和CD14的表达增多，并有明显的统计学意义；基因表达谱改变的研究发现，在与HFCL细胞共培养后，HL60细胞中582个基因表达上调，1323个基因表达下调。结论：HFCL细胞能诱导HL60细胞部分分化，并能明显改变HL60细胞的基因表达谱，为研究基质细胞与白血病细胞之间的相互关系及重要信号分子传导途径或crosstalk等提供了新的线索。【关键词】急性髓系白血病　骨

3、髓成纤维细胞样基质细胞　HL60细胞；基因芯片；基因表达谱　　DifferentiationofHL60CellsDirectlyCoculturedolecularmechanismoftheeffectoffibroblastoidstromalcells(HFCL)fromhumanbonemarroyeloidleukemiaHL60cells,thecellcycleetry(FCM);thecelldifferentiationinedbymorphologyNBTtestan

4、dfloetricdetectionforexpressionofCD11b,CD14,CD13andCD33;thegenesdifferentlyexpressedbetetricoligomicroarraytechnique.ThechangesofexpressioninsomekeygenesedbyusingRTPCRandNorthernblot.TheresultsshoanygenesmaytakepartintheinfluenceofHFCLcellsonHL60ce

5、lls,aygiveimportantinsightsintotheimportantmoleculesandpathalcells.Keyyeloidleukemia;humanbonemarroalcell;HL60cell;genechip;geneexpressionprofile骨髓基质细胞是造血微环境的主要成分，通过分泌细胞因子、直接黏附，对正常造血具有调控作用［1，2］。和正常造血细胞一样，白血病细胞也依赖造血微环境存活。近年来国内外研究越来越发现，微环境在白血病细胞恶性克隆的选

6、择、增殖、分化、迁移和凋亡中起重要作用［3，4］。我们研究发现，正常骨髓成纤维样基质细胞(HFCL)能抑制急性髓系白血病HL60细胞的增殖，抑制细胞周期，影响VEGF因子的表达［5］，但究竟通过什么分子机理目前还不清楚。基因芯片技术以其高通量、高灵敏度，为疾病基因表达研究提供了一种简洁实用的方法。据此，本研究采用AffymetricGenechipHumanGenomeU133A来检测HL60细胞与HFCL细胞共培养前后的基因表达谱的改变，并通过进一步的筛选和分析，以探索HFCL细胞对HL

7、60细胞增殖影响的分子机理。材料正常人骨髓成纤维样基质细胞系HFCL来源于正常人胎儿骨髓基质细胞，由中国医学科学院血液学研究所姜学英教授建系，军事医学科学院基础医学研究所张毅博士提供。人急性髓细胞白血病细胞株HL60为本室保存株。实验用细胞均处于对数生长期。IMDM、RPMI1640培养为Gibco公司产品，新生牛血清为HyClone公司产品；全基因组表达芯片U133A（美国Affymetrix公司产品）；TRIZOLreagent（美国InvitrogenLifeTechnologies公

8、司产品）；RNeasyMiniKit（美国Qiagen公司产品）；EnzoBioArrayHighYieldRNATranscriptLabelingKit、FluidicsStation400、HybridizationOven640、G2500AGeneArrayScanner、MicroarraySuitVersion5.0、MicroDBVersion2.0、DataMiningToolVersion2.0均为美国Affymetrix公司产品；pMD18TVector为TaKaRa大