hplc法测定清热润通胶囊中大黄素及大黄酚的含量

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1、HPLC法测定清热润通胶囊中大黄素及大黄酚的含量【摘要】目的：测定清热润通胶囊中大黄素及大黄酚的含量。方法：采用高效液相法，色谱柱为Yethods：HPLCedonYilipore－Q纯水器。1.2药品与试剂大黄素（批号：110756-200110，20mg）、大黄酚（批号：110796-200311，20mg）由中国药品生物制品检定所提供；清热润通胶囊（批号：060308，山西省中医药研究院制剂中心提供）；甲醇（HPLC级，天津四友提供），其他试剂均为分析纯。2实验方法2.1色谱条件色谱柱为Ym×4.

2、6mm，5μm）；流动相：甲醇－0.1%磷酸溶液（85∶15)；流速为1.0mL/min，检测波长为254nm，柱温为25℃。2.2对照品溶液的制备精密称取适量大黄素对照品、大黄酚对照品，加甲醇制成每1mL含大黄素9.16μg、大黄酚8.02μg的混合对照品溶液。2.3供试品溶液的制备精密称定清热润通胶囊的内容物约2g，研细，加甲醇30mL，称定重量，加热回流提取1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10mL，置烧瓶中，挥去溶剂，加8％盐酸溶液10mL，超声处理（功率2

3、50in，再加三氯甲烷15mL，于水浴上加热回流1h，立即冷却，置分液漏斗中，用三氯甲烷提取3次，每次15mL，合并三氯甲烷提取液，减压回收溶剂至干，残渣加适量甲醇溶解，并定容于10mL量瓶中，滤过，取续滤液，作为供试品溶液［2］。3结果3.1阴性空白试验按处方比例和工艺制备缺大黄的阴性空白样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性空白样品溶液，测定。结果表明，空白对照品色谱图在与标准品及样品色谱图相同位置上无大黄素及大黄酚的色谱峰，表明处方中其他药味无干扰（结果见图1）。3.2线性考察精密吸取大黄素（9.1

4、6μg/mL）及大黄酚（8.02μg/mL）对照品混合溶液，分别进样2.5μL、5μL、10μL、15μL、20μL，对所测得的峰面积（Y）和各对照品进样量（X）作回归处理，得大黄素标准曲线，并计算得到大黄素回归方程为：Y＝4419.805X＋2.492，相关系数r＝0.99992，表明大黄素在0.0229μg～0.1832μg范围内进样量与峰面积值有良好的线性关系。大黄素线性关系考察峰面积数值见表1。另外还得大黄酚标准曲线，并计算得到大黄酚回归方程为：Y＝4493.147X－1.209，相关系数r＝1

5、.00000，表明大黄酚在0.0201μg～0.1608μg范围内进样量与峰面积值有良好的线性关系。大黄酚线性关系考察峰面积数值见表2。3.3精密度试验精密吸取大黄素（9.16μg/mL）及大黄酚（8.02μg/mL）对照品混合溶液，分别按上述含量测定色谱条件进样5次，测得大黄素精密度为：RSD=0.10％（n=5），大黄酚精密度为：RSD=0.20％（n=5），结果见表3。表明本方法精密度良好。3.4稳定性试验取同一供试品溶液，分别于0h、1h、2h、3h、4h、5h、6h进样测定，记录大黄素峰面积，

6、RSD=1.12％，结果表明供试品溶液在6个小时内保持稳定。3.5重复性考察取同一批清热润通胶囊（批号：060308），按上述含量测定色谱条件，测定大黄素及大黄酚含量，方法重复性结果，大黄素：RSD=2.24%（n=5），大黄酚：RSD=1.64%（n=5）为1.64，表明该方法重现性良好。3.6回收率试验取已知含量清热润通胶囊内容物5份，每份约2g，精密称定，分别加入大黄素对照品溶液（0.052mg/mL）及大黄酚对照品溶液（0.086mg/mL）各1mL，按正文成品含量测定项下方法制备供试品溶液，于

7、含量测定色谱条件下测定、计算，大黄素的平均回收率为97.93％（RSD=1.75％），见表4。大黄酚的平均回收率为97.62％（RSD=1.18％），见表5。3.7样品测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL。按上述色谱条件测定，计算样品中大黄素及大黄酚含量，测定结果见表6。4讨论参照中国药典（2005年版）大黄的含量测定方法及其他